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【摘要】目的：探讨Ezrin蛋白在食管癌中的表达及临床意义。方法 搜集本院食管癌术后病理切片，应用免疫组化的方法检测Ezrin蛋白在食管癌组织及癌旁正常组织中的表达情况。结果Ezrin蛋白在食管癌组的表达与癌旁正常组织中的表达存在显著的统计学差异（P<0.05）。食管癌中Ezrin蛋白的阳性表达与肿瘤分化程度呈正相关（P<0.05）。结论Ezrin的表达与食管癌的发生发展有密切相关性，将为临床食管癌的治疗及预后判断提供了新的思路。
【关键词】食管癌； Ezrin；免疫组织化学；基因表达
随着肿瘤转移基因调控下的多阶段、多因素、多步骤理论研究的不断进展，人们对于肿瘤转移这一极为复杂的病理过程有了更进一步的认识。发现并证实与肿瘤转移过程高度相关的基因，已成为肿瘤转移机制研究领域的热点。本研究采用免疫组织化学技术检测Ezrin蛋白的表达，探讨其与食管癌发生、分化的关系，为揭示食管癌发生发展机理提供理论依据。
1. 资料与方法
1.1 材料：收集2008年7月至2010年7月我科行食管癌根治术的食管癌组织标本41例，其中男33例，女8例，年龄在35-71（平均63）岁。全部病例均由组织学病理确诊，术前均未行放疗及化疗。选择其中20例癌旁正常的食管组织为对照组。
1.2 方法与操作步骤：石蜡切片采用柠檬酸抗漂修复缓冲液高温抗原修复法，应用SP免疫组织化学法染色，严格按照试剂盒上的步骤进行，同时用已知阳性片比照.采取PBS液代替一抗作空白对照，并与癌旁组织进行对照。
1.3 结果判定：Ezrin蛋白阳性定位于细胞质或细胞膜，呈明显棕黄色反应即为阳性。每个标本切片选取5个高倍视野（400倍），算出各个视野中阳性细胞数的平均百分比数作为该切片的阳性细胞百分比进行计分，计算阳性细胞平均百分比。染色评判标准按阳性细胞百分比将染色结果分为3级：阳性细胞百分比小于l0%为阴性（一），介于10%和50%之间为阳性（+），大于50%为强阳性（++），阳性和强阳性标本全部统计为阳性组进行统计学处理。
1.4 统计学处理：统计分析采用SPSS 12.0软件，组间计数资料进行用X2检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2. 结果
2.1 Ezrin蛋白在食管癌组织和正常组织中的表达情况：Ezrin蛋白在20例食管癌旁正常组织中有3例（15%）有阳性表达；在41例食管癌组织中，有27例（65.85%） Ezrin蛋白阳性表达。经列联表X2检验分析得出：食管癌组织与癌旁正常之间的Ezrin蛋白表达差异性具有统计学意义（X2=6.34，P<0.05）。
2.2 Ezrin蛋白表达与食管癌分化程度的关系：Ezrin蛋白在食管癌病理类型分化程度中，高分化、中分化和低分化中的阳性表达率分别为55.55%、69.23%和80.00%，其阳性率随着临床分期的增高而降低。
3. 讨论
Ezrin蛋白是Ezrin蛋白亚家族的原型，主要存在于刷状缘和胎盘的微绒毛中。在脊椎动物这一家族目前认为有4个成员，包括ezrin radixin moesin（统称为ERM）及merlin（也称schwannomin）.根据氨基末端结构序列与红细胞膜4.1蛋白带（4.1R）序列同源，故ezrin蛋白亚家族属于4.1蛋白超家族成员。Ezrin蛋白最初是从鸡小肠绒毛中分离所得，是一类细胞骨架连接蛋白，能够将细胞膜、膜受体及其它膜相关结构与肌动蛋白细胞骨架连接成一个有机的整体，参与细胞形态、细胞膜结构的维持，在细胞发育，运动等过程中起重要作用，并参与胞外信号内传和最终效应的实现，调节黏附分子的聚集。
随着对恶性肿瘤转移机制的研究不断深入，Ezrin蛋白愈来愈受到人们的重视。Ezrin蛋白通过调节黏附分子和信号转导等途径，参与细胞与细胞、细胞与基质之间的相互作用，从而在肿瘤发展、浸润和转移过程中起着重要作用。许多致癌基因可以通过分解肌动蛋白丝和减少其在病灶部位的黏附而改变细胞的生物学功能用，肌动蛋白丝结构的改变往往反映了与细胞骨架连接蛋白的减少，这些在微绒毛结构中的改变与细胞内锚定支持及肿瘤细胞分化密切相关，提示Ezrin蛋白在肿瘤转移中起着重要作用。很多类型的肿瘤中都有Ezrin蛋白的突变和表达异常。Elliott等将过表达野生型Ezrin的亲代小鼠乳腺癌细胞株AC2M2移植到同基因型小鼠的乳腺脂肪组织中，结果导致了肺转移。Weng等利用免疫组化检测Ezrin蛋白在恶性纤维组织细胞瘤、脂肉瘤、恶性外周神经鞘瘤、滑膜肉瘤等9种软组织肉瘤中高表达.并与其浸润性生长显著相关.随访后发现Ezrin蛋白表达阳性的病人远处脏器转移率明显升高。Zhang等发现Ezrin蛋白的过表达与肝癌细胞的增殖、侵袭和迁移呈正相关，且Ezrin蛋白的表达下调抑制了高转移潜能细胞系的侵袭能力。
本研究应用免疫组化法检测41例食管鳞癌组织、20例正常食管粘膜上皮组织中Ezrin蛋白的表达，结果显示，Ezrin蛋白在食管鳞状细胞癌中的表达明显高于癌旁及正常组织；本研究还发现，Ezrin蛋白水平的表达与肿瘤的分化程度有关；提示Ezrin的高表达与食管鳞状细胞癌的预后有关。
综上所述，Ezrin的表达与食管癌的发生发展有密切相关性，为我们更深入的了解肿瘤发生发展提供了理论依据的机理，更重要的是，Ezrin基因及其产物，有可能成为抗肿瘤转移的靶点或观察肿瘤患者预后、转移的指标。
参考文献
[1]Curto M， McClatchey AI： Ezrin...a metastatic detERMinant Cancer cell 2004， 5（2）：113-114.
[2]Xie JJ， Xu LY， Xie YM， Zhang HH， Cai WJ， Zhou F， Shen ZY， Li EM： Roles of ezrin in the growth and invasiveness of esophageal squamous carcinoma cells. International journal of cancer 2009， 124（11）：2549-2558.
[3]Chai LX， Sun KL， Guo LP， Zhang HT， Lu SX： [Expression of ezrin and CD44-v6 in human esophageal squamous cell carcinoma and its clinical significance]. Zhonghua zhong liu za zhi [Chinese journal of oncology] 2007， 29（9）：685-688.
[4]Martin TA， Harrison G， Mansel RE， Jiang WG： The role of the CD44/ezrin complex in cancer metastasis. Critical reviews in oncology/hematology 2003， 46（2）：165-186.
[5]Elliott BE， Meens JA， SenGupta SK， Louvard D， Arpin M： The membrane cytoskeletal crosslinker ezrin is required for metastasis of breast carcinoma cells. Breast Cancer Res 2005， 7（3）：R365-373.
[6]Ferrari S， Zanella L， Alberghini M， Palmerini E， Staals E， Bacchini P： Prognostic significance of immunohistochemical expression of ezrin in non-metastatic high-grade osteosarcoma. Pediatric blood & cancer 2008， 50（4）：752-756.
【关键词】食管癌； Ezrin；免疫组织化学；基因表达
随着肿瘤转移基因调控下的多阶段、多因素、多步骤理论研究的不断进展，人们对于肿瘤转移这一极为复杂的病理过程有了更进一步的认识。发现并证实与肿瘤转移过程高度相关的基因，已成为肿瘤转移机制研究领域的热点。本研究采用免疫组织化学技术检测Ezrin蛋白的表达，探讨其与食管癌发生、分化的关系，为揭示食管癌发生发展机理提供理论依据。
1. 资料与方法
1.1 材料：收集2008年7月至2010年7月我科行食管癌根治术的食管癌组织标本41例，其中男33例，女8例，年龄在35-71（平均63）岁。全部病例均由组织学病理确诊，术前均未行放疗及化疗。选择其中20例癌旁正常的食管组织为对照组。
1.2 方法与操作步骤：石蜡切片采用柠檬酸抗漂修复缓冲液高温抗原修复法，应用SP免疫组织化学法染色，严格按照试剂盒上的步骤进行，同时用已知阳性片比照.采取PBS液代替一抗作空白对照，并与癌旁组织进行对照。
1.3 结果判定：Ezrin蛋白阳性定位于细胞质或细胞膜，呈明显棕黄色反应即为阳性。每个标本切片选取5个高倍视野（400倍），算出各个视野中阳性细胞数的平均百分比数作为该切片的阳性细胞百分比进行计分，计算阳性细胞平均百分比。染色评判标准按阳性细胞百分比将染色结果分为3级：阳性细胞百分比小于l0%为阴性（一），介于10%和50%之间为阳性（+），大于50%为强阳性（++），阳性和强阳性标本全部统计为阳性组进行统计学处理。
1.4 统计学处理：统计分析采用SPSS 12.0软件，组间计数资料进行用X2检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2. 结果
2.1 Ezrin蛋白在食管癌组织和正常组织中的表达情况：Ezrin蛋白在20例食管癌旁正常组织中有3例（15%）有阳性表达；在41例食管癌组织中，有27例（65.85%） Ezrin蛋白阳性表达。经列联表X2检验分析得出：食管癌组织与癌旁正常之间的Ezrin蛋白表达差异性具有统计学意义（X2=6.34，P<0.05）。
2.2 Ezrin蛋白表达与食管癌分化程度的关系：Ezrin蛋白在食管癌病理类型分化程度中，高分化、中分化和低分化中的阳性表达率分别为55.55%、69.23%和80.00%，其阳性率随着临床分期的增高而降低。
3. 讨论
Ezrin蛋白是Ezrin蛋白亚家族的原型，主要存在于刷状缘和胎盘的微绒毛中。在脊椎动物这一家族目前认为有4个成员，包括ezrin radixin moesin（统称为ERM）及merlin（也称schwannomin）.根据氨基末端结构序列与红细胞膜4.1蛋白带（4.1R）序列同源，故ezrin蛋白亚家族属于4.1蛋白超家族成员。Ezrin蛋白最初是从鸡小肠绒毛中分离所得，是一类细胞骨架连接蛋白，能够将细胞膜、膜受体及其它膜相关结构与肌动蛋白细胞骨架连接成一个有机的整体，参与细胞形态、细胞膜结构的维持，在细胞发育，运动等过程中起重要作用，并参与胞外信号内传和最终效应的实现，调节黏附分子的聚集。
随着对恶性肿瘤转移机制的研究不断深入，Ezrin蛋白愈来愈受到人们的重视。Ezrin蛋白通过调节黏附分子和信号转导等途径，参与细胞与细胞、细胞与基质之间的相互作用，从而在肿瘤发展、浸润和转移过程中起着重要作用。许多致癌基因可以通过分解肌动蛋白丝和减少其在病灶部位的黏附而改变细胞的生物学功能用，肌动蛋白丝结构的改变往往反映了与细胞骨架连接蛋白的减少，这些在微绒毛结构中的改变与细胞内锚定支持及肿瘤细胞分化密切相关，提示Ezrin蛋白在肿瘤转移中起着重要作用。很多类型的肿瘤中都有Ezrin蛋白的突变和表达异常。Elliott等将过表达野生型Ezrin的亲代小鼠乳腺癌细胞株AC2M2移植到同基因型小鼠的乳腺脂肪组织中，结果导致了肺转移。Weng等利用免疫组化检测Ezrin蛋白在恶性纤维组织细胞瘤、脂肉瘤、恶性外周神经鞘瘤、滑膜肉瘤等9种软组织肉瘤中高表达.并与其浸润性生长显著相关.随访后发现Ezrin蛋白表达阳性的病人远处脏器转移率明显升高。Zhang等发现Ezrin蛋白的过表达与肝癌细胞的增殖、侵袭和迁移呈正相关，且Ezrin蛋白的表达下调抑制了高转移潜能细胞系的侵袭能力。
本研究应用免疫组化法检测41例食管鳞癌组织、20例正常食管粘膜上皮组织中Ezrin蛋白的表达，结果显示，Ezrin蛋白在食管鳞状细胞癌中的表达明显高于癌旁及正常组织；本研究还发现，Ezrin蛋白水平的表达与肿瘤的分化程度有关；提示Ezrin的高表达与食管鳞状细胞癌的预后有关。
综上所述，Ezrin的表达与食管癌的发生发展有密切相关性，为我们更深入的了解肿瘤发生发展提供了理论依据的机理，更重要的是，Ezrin基因及其产物，有可能成为抗肿瘤转移的靶点或观察肿瘤患者预后、转移的指标。
参考文献
[1]Curto M， McClatchey AI： Ezrin...a metastatic detERMinant Cancer cell 2004， 5（2）：113-114.
[2]Xie JJ， Xu LY， Xie YM， Zhang HH， Cai WJ， Zhou F， Shen ZY， Li EM： Roles of ezrin in the growth and invasiveness of esophageal squamous carcinoma cells. International journal of cancer 2009， 124（11）：2549-2558.
[3]Chai LX， Sun KL， Guo LP， Zhang HT， Lu SX： [Expression of ezrin and CD44-v6 in human esophageal squamous cell carcinoma and its clinical significance]. Zhonghua zhong liu za zhi [Chinese journal of oncology] 2007， 29（9）：685-688.
[4]Martin TA， Harrison G， Mansel RE， Jiang WG： The role of the CD44/ezrin complex in cancer metastasis. Critical reviews in oncology/hematology 2003， 46（2）：165-186.
[5]Elliott BE， Meens JA， SenGupta SK， Louvard D， Arpin M： The membrane cytoskeletal crosslinker ezrin is required for metastasis of breast carcinoma cells. Breast Cancer Res 2005， 7（3）：R365-373.
[6]Ferrari S， Zanella L， Alberghini M， Palmerini E， Staals E， Bacchini P： Prognostic significance of immunohistochemical expression of ezrin in non-metastatic high-grade osteosarcoma. Pediatric blood & cancer 2008， 50（4）：752-756.