【摘 要】
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目的设计原代骺板软骨细胞的高效分离法,并对骺板软骨细胞的体外培养进行初步观察.方法改良设计以1 g/L的胰蛋白酶/1g/L的乙二胺四乙酸(EDTA)、1g/L的透明质酸酶和2g/L的Ⅰ型
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目的设计原代骺板软骨细胞的高效分离法,并对骺板软骨细胞的体外培养进行初步观察.方法改良设计以1 g/L的胰蛋白酶/1g/L的乙二胺四乙酸(EDTA)、1g/L的透明质酸酶和2g/L的Ⅰ型胶原酶系列消化分离原代软骨细胞的三步酶消化分离法,观察其对幼兔骺板原代软骨细胞的分离效果;倒置显微镜和光镜下观察体外培养条件下细胞生物学特性.结果(1)三步酶的消化可使软骨基质完全解离降解,细胞均得以分离,收获量与组织湿重呈非常显著的正相关,每克软骨的细胞收获量平均为32.3×106个,细胞存活率平均为97.6%.(2)原代和第1代细胞附壁生长呈三角形或多角形,生长融合时呈卯圆形,Ⅱ型胶原免疫组化和甲苯胺蓝(TB)异染反应均呈阳性;第3代以后细胞逐渐变为梭形,Ⅱ型胶原免疫组化为阴性,TB异染反应明显减弱.结论(1)原代骺板软骨细胞三步酶消化分离法具有细胞收获率高、细胞存活率高、操作简便等特点.(2)随着传代培养次数的增加,骺板细胞出现去分化,逐渐失去软骨细胞的特异性表型.
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