【摘 要】
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目的 构建家蝇天蚕素(Cecropin) Cec4原核表达质粒,表达及纯化Cec4蛋白. 方法 从家蝇cDNA文库中筛选家蝇天蚕素基因Cec4,设计并合成特异性引物,PCR扩增Cec4基因,连接克隆载体
【机 构】
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贵州医科大学医药生物技术工程研究中心,贵州贵阳550025;贵州医科大学生物与工程学院;贵州医科大学基础医学院
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目的 构建家蝇天蚕素(Cecropin) Cec4原核表达质粒,表达及纯化Cec4蛋白. 方法 从家蝇cDNA文库中筛选家蝇天蚕素基因Cec4,设计并合成特异性引物,PCR扩增Cec4基因,连接克隆载体后转入DH5α感受态细胞,通过重组子鉴定及测序完成目的基因的克隆.用限制性内切酶BamHI和HindⅢ双酶切目的基因和质粒,构建GST表达载体pGEX 4T-1-Cec4,转化到大肠埃希菌BL-21中,利用IPTG诱导表达重组Cec4蛋白,经亲和层析纯化后进行SDS-PAGE电泳分析. 结果 PCR扩增获得的Cec4基因全长为192 bp,连接到表达载体pGEX 4T-1获得重组质粒pGEX4T-1-Cec4,转化大肠埃希菌BL-21后经30℃、0.6 mmol/L的IPTG诱导18h,表达相对分子质量约为26×103上清表达的融合蛋白,亲和层析纯化后的蛋白浓度为0.117 mg/ml. 结论 成功构建重组质粒pGEX 4T-1-Cec4并表达和纯化获得Cec4蛋白,为其进一步研究奠定了实验基础.
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