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目的
采用成像毛细管等电聚焦电泳技术(imaged capillary isoelectric focusing, iCIEF)建立分析单克隆抗体(单抗)电荷异质性的平台方法，并用不同亚型单抗(IgG1、IgG2、IgG4)确认该平台方法的适用性。
方法优化该平台方法的部分参数，包括两性电解质和阴极稳定剂体积、聚焦时间和尿素浓度。采用3种亚型单抗(IgG1、IgG2、IgG4)对该平台方法的专属性、精密度、线性、准确度和耐用性进行验证。
结果对样品(单抗)的处理条件为：3 mol/L尿素-0.5%甲基纤维素溶液70 μl、两性电解质(pH3～10) 4 μl、阴极稳定剂(500 mmol/L精氨酸)2 μl、等电点6.14和9.99 Marker各2 μl，最终完成0.2 mg/ml单抗(样品)的制备。检测参数：预聚焦1 500 V、1 min，聚焦3 000 V、8 min。该平台方法的专属性良好，制剂缓冲液对检测无干扰。重复检测6份平行样品以及不同分析员于不同时间检测12份样品各成分含量的相对标准偏差均符合规定的要求。单抗(样品)终浓度为0.1～0.3 mg/ml时，主要和酸性成分的线性决定系数(R2) ≥0.99，碱性成分的线性R2≥0.98。该平台方法检测样品各成分的准确度为92%～105%。耐用性实验设计结果表明，两性电解质(pH3～10)体积和毛细管批次对该平台方法有显著影响。
结论建立的iCIEF平台方法分离度较高，精密度、准确度和耐用性良好，为单抗制品的电荷异质性表征和质量控制提供了更有效的工具。