【摘 要】
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目的 沉默人支气管上皮细胞谷胱甘肽硫转移酶mu5 (GSTM5)的表达,探讨GSTM5参与的氧化/抗氧化失衡对支气管上皮细胞炎症的调节作用.方法 肿瘤坏死因子α(TNF-α)(10 μg/L,24
【机 构】
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广东药科大学附属第一医院呼吸内科,广州,510080510010,广州军区广州总医院呼吸内科;510010,广州军区广州总医院MICU科;
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目的 沉默人支气管上皮细胞谷胱甘肽硫转移酶mu5 (GSTM5)的表达,探讨GSTM5参与的氧化/抗氧化失衡对支气管上皮细胞炎症的调节作用.方法 肿瘤坏死因子α(TNF-α)(10 μg/L,24 h)刺激建立人支气管上皮细胞炎症损伤模型,转染小干扰RNA (siRNA)沉默人支气管上皮细胞GSTM5的表达,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶(NOX)家族NOX1、NOX2、NOX3、NOX4、NOX5、双重氧化酶1(DUOX1)、DUOX2相关基因转录水平;蛋白质印迹法检测NOX1和NOX2蛋白表达水平;比色法检测细胞内丙二醛(MDA)及总抗氧化能力(T-AOC);酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测细胞培养上清液中白介素1β(IL-1β)、IL-6、IL-10、γ-干扰素(IFN-γ)浓度;噻唑兰(MTT)法检测细胞存活率.结果 合成的siRNA-GSTM5序列2组可明显下调入支气管上皮细胞GSTM5 mRNA的表达(P＜0.05);沉默GSTM5组NOX1、NOX2基因转录强度与蛋白表达水平较TNF-α组及阴性对照组相比均增高(P＜0.05),而NOX3、NOX4、NOX5、DUOX1、DUOX2基因表达强度差异无统计学意义(P均＞0.05);沉默GSTM5组较TNF-α组细胞内MDA的增高(P＜0.05),T-AOC能力减弱(P＜0.05),上清液中IL-1β、IL-6、IL-10、IFN-γ浓度均较TNF-α组升高(P均＜0.05),细胞存活率降低(P＜0.05).结论 GSTM5对炎症诱导的支气管上皮细胞炎症损伤有保护作用,下调GSTM5加剧支气管上皮细胞氧化/抗氧化失衡,上调细胞炎症水平,加重细胞损伤.
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