【摘 要】
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壳斗科植物叶片富含色素、多糖及多酚类等物质,采用常规CTAB法、SDS法虽然总DNA产率较高,但多酚类和多糖污染严重;采用进口试剂盒提取,虽能有效降低总DNA中多糖多酚类物质的
【机 构】
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上海应用技术大学生态技术与工程学院,上海,201418;中国科学院上海辰山植物科学研究中心,上海辰山植物园,上海,201602
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壳斗科植物叶片富含色素、多糖及多酚类等物质,采用常规CTAB法、SDS法虽然总DNA产率较高,但多酚类和多糖污染严重;采用进口试剂盒提取,虽能有效降低总DNA中多糖多酚类物质的污染,但DNA产率低,常伴有明显降解,不能满足测序要求,性价比差.因此,现有的DNA提取方法难以满足二代测序酶切法建库对DNA纯度和产量的要求.通过对4种CTAB提取方法进行对比和改良,结合硅胶吸附法,对6种壳斗科植物叶片总DNA抽提进行测试和优化,对比不同方法所获DNA产率、纯度差异和对下游分子生物学实验的影响.结果 表明,常规CTAB法和Rezadoost改良法所获DNA产率高,但多糖污染严重.Sahu改良法所获DNA纯度最高,除糖除酚效果最好,但产率损失最高.而本实验室的改良CTAB法,在细胞核裂解之前,加入含有抗坏血酸、Triton X-100等的漂洗液,有效去除多糖多酚等杂质,所提取的DNA纯度高,产率大,相比核裂解之后进行除杂的效果更优,最适于后期分子实验的应用.进一步采用硅胶吸附可有效纯化并获得高纯度DNA,能满足下游PCR及酶切实验.该方法能有效克服传统CTAB法和试剂盒在壳斗科植物提取中的困难.
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