【摘 要】
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探讨牛奶中叶酸检测的酶联免疫反应(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)方法建立及其叶酸本底含量测定。用竞争性酶联免疫,棋盘法确定最佳抗体包被条件、封闭条件、酶
【基金项目】
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内蒙古自治区高等学校科学研究项目(NJZC13407)
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探讨牛奶中叶酸检测的酶联免疫反应(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)方法建立及其叶酸本底含量测定。用竞争性酶联免疫,棋盘法确定最佳抗体包被条件、封闭条件、酶标抗原浓度等,并进行性能评价测定,检测80例牛奶样品中的叶酸本底含量。结果表明:1最佳ELISA条件为:叶酸抗体以2μg/m L浓度,碳酸盐缓冲液4℃过夜包被,用1%牛血清白蛋白(BSA)封闭,叶酸-辣根过氧化物酶标记物(叶酸-HRP)工作浓度1μg/m L。2该方法最低检测限2.22 ng/m L;精密度测试CV<5%;特异性检测与叶酸类似物的交叉反应率均≤0.1%;本方法与对照方法具有良好的样本测值相关性(r=0.960,P<0.05);该方法加标回收率在94.50%~108.00%之间,回收效果良好;样品基质效应对该方法测值无显著影响。3牛奶样本叶酸本底含量范围为12.55 ng/m L~68.72 ng/m L,均值37.93 ng/m L。本研究建立的ELISA方法能够满足牛奶样品中叶酸含量的检测。
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