【摘 要】
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目的 探讨TNF-α通过NF-κB通路对椎间盘退变小鼠模型髓核间充质干细胞衰老的影响。方法 30只小鼠建立椎间盘退变模型，分离出髓核间充质干细胞（Nucleus Pulposus Mesenchymal Stem cells, NPSCs），对NPSCs进行三系分化诱导鉴定，用含不同浓度梯度TNF-α（0、0.1、1、5、10 ng/mL）的培养液培养NPSCs，按照以上浓度分为五组。MTT检测N
【基金项目】
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赣州市科技局青年人才项目,编号2020-hbqnrc-42； 江西省自然科学基金项目,编号2019BAB205029；
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目的 探讨TNF-α通过NF-κB通路对椎间盘退变小鼠模型髓核间充质干细胞衰老的影响。方法 30只小鼠建立椎间盘退变模型，分离出髓核间充质干细胞（Nucleus Pulposus Mesenchymal Stem cells, NPSCs），对NPSCs进行三系分化诱导鉴定，用含不同浓度梯度TNF-α（0、0.1、1、5、10 ng/mL）的培养液培养NPSCs，按照以上浓度分为五组。MTT检测NPSCs增殖情况，Western-blot检测NF-κB蛋白表达水平，β-半乳糖苷酶染色检测细胞衰老水平，对三种不同浓度（0,1,10 ng/mL）处理的NPSCs进行成软骨诱导分化，Western-blot检测蛋白聚糖（Aggrecan, Agg）、Ⅱ型胶原蛋白（CollagenⅡ, ColⅡ）、性别决定区Y框蛋白-9（sex determining region Y-box9,Sox-9）蛋白表达水平。结果 三系分化结果提示，NPSCs成脂诱导后细胞内可形成脂滴团和鲜红色脂滴泡，成骨诱导可见大量红染的矿化钙盐结节沉积，成软骨诱导细胞呈不规则多角形软骨细胞样改变。与0 ng/mL TNF-α组相比，其余四组NPSCs表现为增殖能力降低，NF-κB蛋白水平增高，衰老染色阳性细胞数量增多，衰老程度较高，且随TNF-α浓度升高，NPSCs的增殖能力逐渐减弱（P＜0.05）,NF-κB水平逐渐增高（P＜0.05），衰老染色阳性细胞数量增多，衰老程度更高（P＜0.05）。三种不同浓度TNF-α组NPSCs成软骨分化后Agg、Col II、Sox-9水平比较无差异（P＞0.05）。结论 TNF-α可通过NF-κB信号通路降低退变小鼠模型NPSCs增殖能力，加速细胞衰老，但并不影响成软骨分化能力。
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