【摘 要】
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本研究旨在构建真核表达载体pIRES2-EGFP-IRF1,并在COS-7细胞中过量表达.根据绵羊IRF1基因cDNA序列设计、合成引物,构建真核表达载体pIRES2-EGFP-IRF1质粒,用电穿孔法,以表达
【基金项目】
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转基因生物新品种培育重大专项抗病转基因羊新品种培育;
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本研究旨在构建真核表达载体pIRES2-EGFP-IRF1,并在COS-7细胞中过量表达.根据绵羊IRF1基因cDNA序列设计、合成引物,构建真核表达载体pIRES2-EGFP-IRF1质粒,用电穿孔法,以表达质粒转染COS-7细胞,并用LPS刺激,用定量PCR方法检测IRF1基因的表达量是否升高.结果表明:重组质粒pIRES2-EGFP-IRF1转染细胞后,可以观察到绿色荧光蛋白的表达,并且可以过量表达,与空白对照组相比差异极显著(P＜0.01),说明通过转染的确会对细胞造成影响,排除转染试剂及未融合GFP的作用后,效果仍然明显.利用LPS刺激后,随着作用时间延长至24 h,IRF1基因的表达量较未用LPS作用的对照组有更高倍数的提高.
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