【摘 要】
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目的 探讨褪黑素调控沉默信息调节因子1(SIRT1)/叉头框转录因子O1(FOXO1)通路对椎间盘髓核细胞(NPCs)退变的影响.方法 分离并培养NPCs,CCK-8法确定过氧化氢和褪黑素浓度;将过氧化氢处理的NPCs随机分为过氧化氢组(200μmol/L过氧化氢)、褪黑素组(200μmol/L过氧化氢、1μmol/L褪黑素)、褪黑素+siRNA NC组(细胞转染siRNA NC、200μmol/L过氧化氢、1μmol/L褪黑素)、褪黑素+siRNA SIRT1组(细胞转染siRNA SIRT1、200μ
【机 构】
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430010 武汉,长江航运总医院骨外科
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目的 探讨褪黑素调控沉默信息调节因子1(SIRT1)/叉头框转录因子O1(FOXO1)通路对椎间盘髓核细胞(NPCs)退变的影响.方法 分离并培养NPCs,CCK-8法确定过氧化氢和褪黑素浓度;将过氧化氢处理的NPCs随机分为过氧化氢组(200μmol/L过氧化氢)、褪黑素组(200μmol/L过氧化氢、1μmol/L褪黑素)、褪黑素+siRNA NC组(细胞转染siRNA NC、200μmol/L过氧化氢、1μmol/L褪黑素)、褪黑素+siRNA SIRT1组(细胞转染siRNA SIRT1、200μmol/L过氧化氢、1μmol/L褪黑素),另取不使用过氧化氢处理的非转染NPCs为对照组.检测各组细胞中SIRT1 mRNA表达水平、细胞凋亡率、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)含量,聚集蛋白聚糖(Aggre-can)、Ⅱ型胶原蛋白(collagenⅡ)、SIRT1蛋白表达和FOXO1乙酰化(acely-FOXO1)水平.结果 与对照组比较,过氧化氢组NPCs中SIRT1 mRNA表达水平、Aggrecan、collagenⅡ、SIRT1蛋白表达水平显著降低,TNF-α和IL-1β含量、细胞凋亡率以及acely-FOXO1蛋白水平显著升高(P<0.05).与过氧化氢组相比,褪黑素组NPCs中SIRT1 mRNA表达水平、Aggrecan、collagenⅡ、SIRT1蛋白表达水平显著升高,TNF-α和IL-1β含量、细胞凋亡率及acely-FOXO1蛋白水平显著降低(P<0.05);与褪黑素组和褪黑素+siRNA NC组比较,褪黑素+siRNA SIRT1组NPCs中SIRT1 mRNA表达水平、Aggrecan、collagenⅡ、SIRT1蛋白表达水平显著降低,TNF-α和IL-1β含量、细胞凋亡率以及acely-FOXO1蛋白水平显著升高(P<0.05).结论 褪黑素能够通过上调SIRT1表达,抑制FOXO1乙酰化,减轻炎症反应,减少NPCs凋亡,延缓椎间盘NPCs退化.
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