【摘 要】
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目的观察沉默多药耐药相关蛋白4(MRP4)基因对SMMC-7721耐阿霉素细胞株(SMMC-7721-ADM)的影响。方法实验分为4组:SMMC-7721组、SMMC-7721-ADM组、SiNC-SMMC-7721-ADM阴性转染组、沉默MRP4的小干扰RNA(siMRP4)-SMMC-7721-ADM转染组;设计并筛选出抑制效率最高的siMRP4;Western blot及反转录-聚合酶链反应
【机 构】
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目的观察沉默多药耐药相关蛋白4(MRP4)基因对SMMC-7721耐阿霉素细胞株(SMMC-7721-ADM)的影响。
方法实验分为4组:SMMC-7721组、SMMC-7721-ADM组、SiNC-SMMC-7721-ADM阴性转染组、沉默MRP4的小干扰RNA(siMRP4)-SMMC-7721-ADM转染组;设计并筛选出抑制效率最高的siMRP4;Western blot及反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组MRP4蛋白和mRNA的表达水平;噻唑蓝(MTT)法观察各组对阿霉素(ADM)、5-氟尿嘧啶(5-Fu)、长春新碱(VCR)和奥沙利铂(OHP)的敏感性;流式细胞术检测各组细胞凋亡。
结果浓度为25 mol/L的4-6-MRP4抑制效率为87.60%,选其为siMRP4;SMMC-7721组中MRP4 mRNA和蛋白极少量或不表达(0.08±0.03,P< 0.05;0.025±0.009,P< 0.05),SMMC-7721-ADM组显著高表达(8.76±0.08,P< 0.05;0.684±0.004,P< 0.05),siMRP4-SMMC-7721-ADM转染组(1.00 ±0.01,P< 0.05;0.180±0.003,P< 0.05)较SMMC-7721-ADM组明显下降但仍稍高于SMMC-7721组;siMRP4-SMMC-7721-ADM转染组与SMMC-7721-ADM组比较对ADM、5-Fu、VCR和OHP的耐药系数(RI)分别为0.40、0.85、0.32、0.05,较SMMC-7721-ADM对化疗药物敏感性增强(P< 0.05),siMRP4转染组凋亡率3.26%较SMMC-7721-ADM组增加(P< 0.05)。
结论MRP4在SMMC-7721极少量或不表达,SMMC-7721-ADM肝癌细胞株高表达,沉默MRP4能较大程度逆转其化疗耐药性。
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