【摘 要】
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目的 实现严重急性呼吸综合征冠状病毒2 (severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)受体结合域(receptor-binding domain,RBD)蛋白的高效分泌表达,获得纯度较高的目的 蛋白,并对目的 蛋白与不同抗体的结合活性进行比较分析.方法 将SARS-CoV-2 S蛋白RBD和RBD-Mouse IgG2a Fc基因优化合成后分别克隆入pcDNA3.1(+)或者pLexm表达载体,然后将获得的重组质粒转染HEK293F
【机 构】
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兰州生物制品研究所有限责任公司第二研究室甘肃省疫苗工程技术研究中心,甘肃兰州730046
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目的 实现严重急性呼吸综合征冠状病毒2 (severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)受体结合域(receptor-binding domain,RBD)蛋白的高效分泌表达,获得纯度较高的目的 蛋白,并对目的 蛋白与不同抗体的结合活性进行比较分析.方法 将SARS-CoV-2 S蛋白RBD和RBD-Mouse IgG2a Fc基因优化合成后分别克隆入pcDNA3.1(+)或者pLexm表达载体,然后将获得的重组质粒转染HEK293F细胞,比较不同表达载体及添加标签对目的 蛋白表达量的影响,选取表达量高的重组质粒进行后续转染,收获细胞上清后进行蛋白纯化.纯化后的蛋白分别与灭活SARS-CoV-2免疫马血清、CR3022抗体进行反应,比较RBD蛋白与不同抗体的结合活性.结果 成功构建含SARS-CoV-2 RBD序列的不同重组表达质粒,表达结果显示,与其他质粒相比,RBD-mg2afc/pcDNA3.1(+)在细胞上清中获得较高水平的表达.纯化后的RBD蛋白纯度大于95％,Western blot检测结果显示,加热变性后的目的 蛋白可以与灭活SARS-CoV-2免疫马血清发生特异性反应,但是与CR3022抗体几乎不发生反应;ELISA检测结果表明,纯化后的RBD蛋白可以与2种抗体均发生特异性反应,当抗原包被量低于500 ng/孔时,RBD蛋白与灭活SARS-CoV-2免疫马血清的结合能力高于其与CR3022抗体的结合能力,当抗原包被量高于500 ng/孔时,RBD蛋白与CR3022抗体的结合能力更强.结论 成功表达和纯化了RBD蛋白,该蛋白在不同包被抗原量条件下与抗体的结合活性不同.
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1 引言:掌握物理学认识路径的必要性rn物理学是自然科学领域的一门基础学科,研究自然界物质的基本结构、相互作用和运动规律.物理学基于观察与实验,建构物理模型,应用数学等工具,通过科学推理和论证,形成系统的研究方法和理论体系[1].物理学史表明,每一次物理学思想上的危机,都孕育着物理学上的一次重大的突破,而每一次重大的突破,都会强烈地在当代乃至下一代的哲学思想上留下不灭的印记.牛顿、爱因斯坦等在物理学发展进程中所做出的贡献,始终伴随着他们从哲学高度所阐发的思想,不仅对物理学,对全部自然科学乃至社会科学的探究
1 中国物理学会谢希德物理奖:白海洋rn中国科学院物理研究所白海洋研究员长期从事非晶态物理研究.非晶态物质原子排列长程无序,难以建立常规构效关系.她从非晶动力学入手,建立动力学和性能关联,提出动力学调控非晶性能新思路.提出非晶动力学不均匀性观点及“流变单元”模型.通过调控流变单元,实现了非晶合金室温拉伸塑性,发展了动力学调控宏观性能新方法.开展了极端条件下性能及低维非晶材料动力学研究,高压获得高能及超稳态非晶合金.在低维非晶纳米颗粒动力学研究方面取得重要进展.
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