【摘 要】
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目的 建立血管内皮细胞高效表达人衰变加速因子(hDAF)基因的转基因小鼠.方法 采用受精卵显微注射法,将包含杂合内含子(UI)的人hDAF导入昆明白小鼠受精卵的雄原核内,然后将注
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目的 建立血管内皮细胞高效表达人衰变加速因子(hDAF)基因的转基因小鼠.方法 采用受精卵显微注射法,将包含杂合内含子(UI)的人hDAF导入昆明白小鼠受精卵的雄原核内,然后将注射后仍健康的受精卵植入假孕母鼠输卵管内,待其自然分娩.应用聚合酶链反应(PCR)和Southern杂交检测G0代小鼠hDAF基因的整合情况,应用流式细胞计数(FCM)检测小鼠外周血单核细胞(PBMCs)表面hDAF的表达,应用逆转录(RT)-PCR检测转基因小鼠心脏、肝脏、肾脏和肺脏人hDAF基因mRNA的表达.结果 注射后卵的存活率和幼鼠出生率分别为83.8%(941/1123)和9.5%(89/941),外源基因的整合率为22.5%(20/89),FCM检测发现其中有7只转基因小鼠PBMCs有人hDAF表达,表达强度为人PBMCs的152%～243%,并且相应小鼠的心、肝、肾及肺组织均有人hDAF mRNA表达.结论 UI可以使hDAF在转基因鼠各主要脏器高效表达.
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