建立人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)的H2O2氧化损伤模型,探讨重组人MG53蛋白(rhMG53)对hUC-MSCs氧化损伤的保护作用。
方法使用组织块培养法从健康人脐带沃顿胶组织中分离培养hUC-MSCs,流式细胞仪检测细胞表型;CCK-8法检测hUC-MSCs的增殖和H2O2损伤程度。实验分为正常对照组(NC组)、rhMG53组、H2O2组和H2O2+rhMG53组。分别采用CCK-8法、Transwell小室、流式细胞术和β-半乳糖苷酶染色检测rhMG53蛋白对hUC-MSCs增殖、迁移、周期凋亡和衰老的影响。各组、各个时间点的吸光值采用析因设计的方差分析,组间比较采用单因素方差分析。
结果hUC-MSCs贴壁呈梭型生长,高表达间充质干细胞标志CD44、CD133、HLA-ABC,低表达CD34、CD45;H2O2对hUC-MSCs具有浓度和时间依赖性的损伤作用,确定200μmol/L的H2O2处理16 h为hUC-MSCs氧化损伤的最适条件。与NC组相比,H2O2组细胞增殖(0.994±0.011vs1.331±0.014)、迁移率(8.15﹪±2.47﹪ vs33.34﹪±3.62﹪)和S期细胞比例(29.67﹪±3.69﹪ vs34.33﹪±4.25﹪)显著降低,细胞衰老(44.07﹪±5.26﹪ vs5.7﹪±1.42﹪)和凋亡比例(52.63﹪±5.76﹪ vs4.65﹪±1.23﹪)显著增加,差异具有统计学意义(均P < 0.05);rhMG53组细胞增殖(1.509±0.086vs1.331±0.014)和迁移率(52.13﹪±5.46﹪ vs33.34﹪±3.62﹪)显著提高,S期比例(35.27﹪±4.79﹪ vs34.33﹪±4.25﹪)变化差异无统计学意义(P> 0.05),细胞衰老(3.92﹪±1.31﹪ vs5.7﹪±1.42﹪)和凋亡比例(3.96﹪±1.06﹪ vs4.65﹪±1.23﹪)显著降低,差异具有统计学意义(均P< 0.05)。与H2O2组相比,H2O2+ rhMG53组细胞增殖(1.252±0.056vs0.994±0.011)、迁移率(18.93﹪±3.12﹪ vs 8.15﹪±2.47﹪)和S期比例(34.84﹪±3.45﹪ vs29.67﹪±3.69﹪)显著提高,细胞衰老(17.89﹪±2.64﹪ vs44.07﹪±5.26﹪)和凋亡比例(4.65﹪±1.23﹪ vs17.63﹪±2.56﹪)显著降低,差异具有统计学意义(均P< 0.05)。
结论rhMG53对H2O2造成的hUC-MSCs氧化损伤有保护作用。