【摘 要】
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利用RT-PCR方法从低氧预处理的A549细胞中获得HIF-1α基因片段,将其定向插入pIRES-SEQ质粒NheⅠ、MLuⅠ2个酶切位点之间,得到真核表达载体pIRES-HIF-1α;采用电转化方法将其
【机 构】
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甘肃农业大学动物医学院,兰州军区兰州总医院检验科
【基金项目】
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兰州军区后勤科研项目（CLZ11J09）, 兰州军区卫生项目（CLZ11JB04）
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利用RT-PCR方法从低氧预处理的A549细胞中获得HIF-1α基因片段,将其定向插入pIRES-SEQ质粒NheⅠ、MLuⅠ2个酶切位点之间,得到真核表达载体pIRES-HIF-1α;采用电转化方法将其电转化入减毒沙门氏菌Ty21α中,获得重组减毒沙门氏菌菌株TPH;转染A549细胞,RT-PCR法检测HIF-1α基因表达,ELISA方法检测HIF-1α蛋白表达;TPH菌株在氨苄青霉素（＋）和氨苄青霉素（-）LB培养板上分别传代40代,每10代提取质粒进行PCR及酶切鉴定.结果表明：试验成功构建了携带H
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