【摘 要】
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由新型鸭呼肠孤病毒(Novel duck reovirus,NDRV)引起的NDRV病是困扰我国养鸭业的主要疾病之一.绿原酸(chlorogenic acid,CHA)作为许多中药的主要成分,在抗病毒方面发挥着重要
【机 构】
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山东省农业科学院家禽研究所,济南250023山东农业大学动物科技学院,泰安271018;山东省农业科学院家禽研究所,济南,250023;
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由新型鸭呼肠孤病毒(Novel duck reovirus,NDRV)引起的NDRV病是困扰我国养鸭业的主要疾病之一.绿原酸(chlorogenic acid,CHA)作为许多中药的主要成分,在抗病毒方面发挥着重要作用.本研究拟明确CHA在NDRV感染幼仓鼠(Mesocricetus auratus)肾细胞系BHK-21不同阶段的抗病毒作用效果,为CHA抗NDRV的临床治疗提供参考依据.首先根据NDRV的S3基因序列(GenBank No.KJ879932)设计引物,建立NDRV实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative PCR,qPCR)检测方法;然后采用细胞增殖-毒性检测试剂盒测定CHA的细胞毒性,确定CHA在BHK-21细胞上的最大安全浓度;最后进行抗病毒试验,组Ⅰ向BHK-21细胞接种病毒NDRV,然后加入不同浓度的CHA,定期收集细胞冻融液;组Ⅱ的病毒吸附方式与组Ⅰ相同,用药前病毒NDRV先在BHK-21细胞上增殖10 h,定量检测增殖10 h后的病毒载量作为基值;以病毒增殖10 h为实验起始点,分别加入不同浓度的CHA,后续流程与组Ⅰ相同;以上两组均设置阴性和阳性对照.定期观察细胞病变,并将收集的样品进行NDRV的qPCR检测.结果显示,本研究建立的用于NDRV检测的qPCR方法最低检测限为92.5拷贝/μL;CHA在BHK-21细胞上的最大安全浓度为128μg/mL;CHA能在体外抑制NDRV增殖,存在明显的剂量效应关系.本研究可为NDRV的相关机制研究和实际应用提供基础资料.
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