【摘 要】
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目的构建携带人骨形成蛋白7(hBMP-7)基因的绿色荧光蛋白真核表达载体pEGFP-hBMP-7,体外转染小鼠基质细胞系W-20-17,检测相关生物学活性的变化.方法应用亚克隆法构建真核表达
【机 构】
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武汉大学口腔医学院口腔生物医学工程教育部重点实验室
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目的构建携带人骨形成蛋白7(hBMP-7)基因的绿色荧光蛋白真核表达载体pEGFP-hBMP-7,体外转染小鼠基质细胞系W-20-17,检测相关生物学活性的变化.方法应用亚克隆法构建真核表达载体pEGFP-hBMP-7,酶切电泳鉴定.脂质体法转染W-20-17细胞,检测瞬时转染效率及目的基因的表达,观察细胞形态及生长情况,检测碱性磷酸酶(ALP)、钙结节及骨钙素等成骨细胞表型.结果48 h后,基因转染效率达到40%,报告基因及免疫荧光证明目的基因的表达.目的基因转染后细胞形态未见明显变化,增殖能力无明显改变,ALP活性明显增高,钙结节增多,骨钙素表达增强.结论成功构建了具有生物学活性的pEGFP-hBMP-7,基因转染后能诱导W-20-17细胞向成骨细胞表型转化.
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