【摘 要】
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目的探讨稳定低表达DNA甲基转移酶3b(DNMT3b)基因对人膀胱癌细胞生长和凋亡的影响。方法包装表达DNMT3b si RNA和阴性对照si RNA的慢病毒,通过慢病毒感染的方法获得稳定低表
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目的探讨稳定低表达DNA甲基转移酶3b(DNMT3b)基因对人膀胱癌细胞生长和凋亡的影响。方法包装表达DNMT3b si RNA和阴性对照si RNA的慢病毒,通过慢病毒感染的方法获得稳定低表达DNMT3b的膀胱癌细胞BIU-87及对照细胞。MTT和流式细胞仪检测DNMT3b稳定低表达对细胞增殖和凋亡的影响;体内裸鼠成瘤实验观察DNMT3b稳定低表达对肿瘤的抑制效果;荧光定量PCR和Western blot检测DNMT3b稳定低表达对细胞生长和凋亡相关基因表达的影响;甲基化特异性PCR检测对细胞生长和凋亡相关基因甲基化的影响。结果荧光定量PCR和Western blot检测结果显示,DNMT3b m RNA和蛋白水平在BIU-87稳定细胞株中稳定低表达;DNMT3b稳定低表达可以抑制BIU-87细胞的生长,并且抑制裸鼠皮下瘤体的生长;DNMT3b稳定低表达可以促进BIU-87细胞的凋亡;DNMT3b稳定低表达可以增加凋亡及细胞生长相关基因DAPK,Bax和RASSF1A m RNA和蛋白水平的表达;DNMT3b稳定低表达可以减少凋亡及细胞生长相关基因DAPK,Bax和RASSF1A启动子区域的甲基化水平。结论 DNMT3b稳定低表达可能通过调控凋亡相关基因以及细胞生长相关基因启动子区域的甲基化水平来影响基因的表达,从而抑制BIU-87细胞的生长,诱导细胞凋亡。
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