【摘 要】
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目的 观察丝裂霉素C(MMC)对成纤维细胞诱导凋亡的作用及机制.方法 体外培养成纤维细胞并传至5～8代,分别用含有0～0.3g/L MMC的MEM培养液处理成纤维细胞12h后CCK-8试剂盒检测不同
【机 构】
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南京医科大学第一附属医院骨科,南京医科大学基础医学院生理系
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目的 观察丝裂霉素C(MMC)对成纤维细胞诱导凋亡的作用及机制.方法 体外培养成纤维细胞并传至5～8代,分别用含有0～0.3g/L MMC的MEM培养液处理成纤维细胞12h后CCK-8试剂盒检测不同浓度MMC对成纤维细胞的生长抑制效果;以0～0.2g/L MMC处理细胞爬片后用Hoechest33342细胞核染色,荧光显微镜下观察凋亡细胞核形态并用image pro-plus软件计数凋亡细胞;按不加药培养细胞12 h作对照组、0.2g/L.MMC培养细胞12h、P13K/Akt抑制剂LY294002 100 nmol/L与MEK/ERK抑制剂PD98059 100nmol/L分别处理细胞1h后换新鲜培养基培养11h分为4组,提取胞质蛋白,Western blot法检测Caspase-3、p-ERK1/2、p-Akt表达量.结果 MMC对成纤维细胞的抑制率与药物浓度呈正相关性,0.2g/L MMC对细胞活性抑制率达50.21%;Hoeeheat33342细胞核染色随MMC浓度升高出现凋亡细胞核特征的染色质凝聚,边集,呈亮蓝色核的比率逐渐增高,凋亡细胞计数显示0.05、0.1、0.2g/L MMC处理组凋亡率显著高于其他低浓度组,差异有统计学意义(P
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