【摘 要】
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本试验通过设计并合成1对引物,PCR扩增B型产气荚膜梭菌C58-2株α毒素完整成熟肽序列,并将其插入到pGEM-T Easy载体中,构建克隆载体pGEM-T-α。对克隆载体pGEM-T-α进行EcoRⅠ
【基金项目】
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动物生物制品国家工程研究中心项目-羊腐败梭菌、c型产气荚膜梭菌、D型产气荚膜梭菌三联类毒素研发
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本试验通过设计并合成1对引物,PCR扩增B型产气荚膜梭菌C58-2株α毒素完整成熟肽序列,并将其插入到pGEM-T Easy载体中,构建克隆载体pGEM-T-α。对克隆载体pGEM-T-α进行EcoRⅠ和HindⅢ的双酶切,将得到的1 125bp片段以正确的阅读框架定向克隆于pET-28a（＋）中,然后将重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）plys宿主菌中,37℃、1.0 mmol/L IPTG诱导该片段获得良好表达。经SDS-PAGE分析,其表达的蛋白约为46.1ku,与预期大小一致。Western
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