目的建立血清中microRNA(miRNA)的实时荧光定量PCR(qRT-PCR)的检测方法,对慢性乙型肝炎患者血清中miR-122和miR-22的表达水平进行检测和分析,探讨其在慢性乙型肝炎患者血清中表达的意义。方法茎环引物用于成熟型miRNA反转录,以建立SYBR GreenⅠPCR筛选和定量检测miRNA的方法。同时,采用10倍梯度稀释的miR-122标准品c DNA(1~109拷贝/微升)评价其敏感度;采用熔解曲线评价其检测miRNA的特异性;通过对2×105、2×106、2×107拷贝/微升的miR-122标准品c DNA分别进行批内20次重复实验,以其循环阈值(Ct)的变异系数(CV)评价其精密度。采用建立的qRTPCR技术检测慢性乙型肝炎患者及正常人血清中miR-122和miR-22的表达水平。结果建立了茎环引物的RT-PCR法检测血清中的miRNA,该方法的线性范围宽,敏感度高,重复性好,方法简便。在慢性乙型肝炎患者组中血清miR-122和miR-22的相对表达量分别为17.88和5.35;与正常对照组中血清miR-122和miR-22的相对表达量(分别为1.80和1.67)比较,差异有统计学意义(P均=0.000)。结论建立了茎环引物RT-PCR实时荧光定量PCR方法检测血清中的miR-122和miR-22,血清miR-122和miR-22在慢性乙型肝炎患者的血清中表达显著升高。