【摘 要】
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利用基因克隆和体外转录技术制备病毒性出血性败血症病毒（VHSV）核酸检测标准物质。设计VHSV N基因的克隆引物,RT-PCR获得相应片段,连接至pGEM-T载体,测序后采用体外转录方法制
【机 构】
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广东出入境检验检疫局检验检疫技术中心广东省动植物与食品进出口技术措施研究重点实验室
【基金项目】
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国家质检总局科技项目（2016IK047）
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利用基因克隆和体外转录技术制备病毒性出血性败血症病毒（VHSV）核酸检测标准物质。设计VHSV N基因的克隆引物,RT-PCR获得相应片段,连接至pGEM-T载体,测序后采用体外转录方法制备RNA纯品。初步定量稀释后,混合分装作为核酸标准物质候选物。采用核酸浓度测定与拷贝数换算的方法对转录的RNA片段进行定值。通过绘制荧光定量标准扩增曲线计算标准物质含量（拷贝数）,并根据委托单位的定值结果进行不确定度的估算。均一性结果显示瓶间差异小于5%,稳定性试验表明室温20℃~25℃（相对湿度20%~25%）7 d,
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