【摘 要】
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目的 获得日本血吸虫TGF-β受体I胞外段(SjTβ3RIout)的序列,行原核克隆和表达,并分析其蛋白的免疫学功能.方法 应用cDNA末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNA ends
【机 构】
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广州医学院病原生物学与免疫学教研室,广东,广州,510182
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目的 获得日本血吸虫TGF-β受体I胞外段(SjTβ3RIout)的序列,行原核克隆和表达,并分析其蛋白的免疫学功能.方法 应用cDNA末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNA ends,RACE)方法获得SjTβRI基因cDNA部分序列,用RT-PCR方法扩增SjTβRI胞外段(SjTβRlout)基因,构建pET28a(+)重组原核表达载体,并测序鉴定.将质粒转入大肠埃希菌,IPTG诱导表达,并使用Ni离子亲和层析并透析处理获得纯化重组蛋白.使用纯化蛋白与弗氏佐剂共同免疫SD大鼠获得抗血清,使用ELISA方法检测血清中SjTBRIout特异抗体IgG含量.结果 成功构建SjTβRIout原核表达载体.测序鉴定显示SjTβ3RIout包含399 bp,编码133个氨基酸,并且与曼氏血吸虫TGF-β受体I的同源性较高.重组蛋白经SDS-PAGE分析,显示其相对分子质量约为20 000,与目的 基因编码蛋白的预测分子量相符.经重组蛋白免疫的SD大鼠产生高效价(>1:100 000000)的抗原特异性IgG抗体.结论 首次获得pET28a(+)-SjTβRIout的重组蛋白,并且证明其具有良好的免疫原性.
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