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本文介绍了关节软骨细胞的分离、冷冻保存和复苏技术，并在阐明胶原酶的细胞毒性作用的基础上，提出了分阶段消化法，以减少分离细胞的损伤，由于低温保护剂DMSO也具有细胞毒性，因而应尽量缩短DMSO与软骨细胞在4℃以上的接触时间。降温和复温速度是影响细胞存活的关键因素。降温速度从4℃～-80℃以1℃/min为佳，之后迅速投入-196℃的液氮中长期保存。细胞复苏应采用37℃水浴快速复温法。虽然检测冻存细胞的存活率可采用苔盼蓝拒染试验，但最可靠的方法是细胞培养。利用关节软骨细胞库进行细胞培养、电镜观察和激光流式细胞计量分析，结果证明冻存软骨细胞复苏后仍具有正常的结构和形态并保持新陈代谢和自我复制功能。