【摘 要】
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目的观察过表达核心蛋白聚糖(DCN)基因对胆管癌细胞周期及凋亡的影响。方法脂质体介导真核表达质粒pEGFP-DCN和空载体pEGFP-N1转入人胆管癌细胞株QBC939,Western blot检测DCN蛋白的表达,实时定量反转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测DCN mRNA的表达,克隆形成实验计算克隆形成率,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞周期及凋亡。结果RT-qPC
【机 构】
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目的观察过表达核心蛋白聚糖(DCN)基因对胆管癌细胞周期及凋亡的影响。
方法脂质体介导真核表达质粒pEGFP-DCN和空载体pEGFP-N1转入人胆管癌细胞株QBC939,Western blot检测DCN蛋白的表达,实时定量反转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测DCN mRNA的表达,克隆形成实验计算克隆形成率,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞周期及凋亡。
结果RT-qPCR示过表达DCN相对空载体上调32.34倍;Western blot结果示过表达组DCN上调2.00倍。pEGFP-DCN转染组细胞克隆形成数[(210.9±19.3)个]显著低于空质粒转染组[(608.7±56.3)个],差异有统计学意义(P< 0.05)。转染pEGFP-DCN细胞与空载体比较,细胞增殖能力显著降低,差异有统计学意义(P< 0.05)。流式细胞周期检测显示,胆管癌细胞转染pEGFPDCN后G1~ G0期细胞比例明显升高,而G2~ S期细胞减少,细胞周期被阻滞在G1~ G0期,凋亡分析转染pEGFP-DCN的QBC939细胞较转染空载体细胞凋亡显著增加,半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3明显增高,而B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)的表达水平明显降低(0.787±0.068比1.276±0.157)。
结论转染DCN能够显著抑制胆管癌细胞的增殖,明显促进胆管癌细胞凋亡,而DCN促进胆管细胞凋亡与上调Caspase-3和下调bcl-2蛋白相关。
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