【摘 要】
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通过Heymann肾炎受体相关蛋白的研究,探讨Heymann肾炎的分子发病机制.运用基因重组技术,将编码受体相关蛋白羧基端108个氨基酸多肽(RAP324)的cDNA克隆到大肠杆菌高效表达载体
【机 构】
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南通医学院附属医院肾病研究室,南通,226001南通医学院分子生物学研究室;
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通过Heymann肾炎受体相关蛋白的研究,探讨Heymann肾炎的分子发病机制.运用基因重组技术,将编码受体相关蛋白羧基端108个氨基酸多肽(RAP324)的cDNA克隆到大肠杆菌高效表达载体pGEX.通过异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导,表达了分子量为44×103的融合蛋白.经GST-Sepharose4B亲和层析柱,纯化了融合蛋白.表达产物经Westernblot分析.羧基端受体相关蛋白融合蛋白在pGEX中得到高效表达,其分子量为44×103.每升培养液纯化到20～30mg的融合蛋白.Westernblot分析表明抗RAP324融合蛋白的抗血清识别天然肾小管刷状缘膜抗原FXIA中分子量约44×l03的带.间接免疫荧光显示该融合蛋白抗体结合于肾小管刷状缘.表明受体相关蛋白羧基端108氨基酸多肽链上存在致肾炎的病理性表型.
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