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目的采用高效液相色谱-质谱联用技术建立冬虫夏草蛋白特征图谱的快速分析方法。方法 采用SepaxBio-C4色谱柱（4.6mm×150mm，3μm），以0.1%甲酸（A）-0.1%甲酸/乙腈（B）为流动相进行梯度洗脱，流速0.6mL·min-1，柱温30℃，质谱检测器。采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”（2012版）对冬虫夏草色谱图进行处理，并计算所有批次的相似度。结果 建立了冬虫夏草蛋白对照特征图谱，标示出了4个共有峰，12批冬虫夏草与对照特征图谱相似度均大于0.90，22批冬虫夏草混淆品的相似度均＜0.10。结论 本研究建立的方法可有效鉴别冬虫夏草及其混淆品，为冬虫夏草的真伪鉴别技术的提升提供了技术支持。