胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞生长状况及ABCA3表达变化的初步研究

来源 :南京医科大学学报(自然科学版) | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhangshun102
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目的:观察原代培养胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(typeⅡalveolar epithelial cell,AECⅡ)的生长状况及AECⅡ特异性蛋白ATP结合盒转运蛋白A3(ATP binding cassette transporter A3,ABCA3)的表达变化,为有关新生儿肺发育及肺部疾病的研究奠定一定基础。方法:采用胰酶联合胶原酶消化肺组织,差速离心及差速贴壁法纯化细胞;电子显微镜鉴定AECⅡ细胞;倒置相差显微镜观察不同时间点细胞生长状态;MTT法绘制细胞生长曲线;免疫荧光技术观察ABCA3动态表达变化。结果:电镜下观察到AECⅡ特征性板层小体,大小及数量不等,胞膜外缘分布有刺状微绒毛;MTT法测得铺板后第24、36、48、72、96、120 h的吸光度值分别为0.177±0.009,0.193±0.011,0.212±0.019,0.253±0.019,0.243±0.012,0.192±0.011。光学显微镜下细胞形态逐渐拉长,变扁平,细胞内颗粒逐渐减少。免疫荧光示ABCA3表达逐渐下降。结论:原代培养的胎鼠AECⅡ在培养早期生长状况最佳,ABCA3表达最丰富,故在早期(即培养72 h以内)进行肺发育疾病相关机制的研究较为理想。
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