扎伊尔型埃博拉病毒实时荧光定量PCR方法的建立

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目的建立扎伊尔型埃博拉病毒实时荧光定量PCR快速检测技术。方法人工合成扎伊尔型埃博拉病毒包膜糖蛋白GP基因上1 969~2 113 bp的保守特异片段,克隆到p UC57重组质粒中,构建阳性模板;以103~109拷贝数的重组质粒样品共7组作为标准品,制作标准曲线;设计上游引物5’-GAACCACATGATTGGACCAAGA-3’、下游引物5’-TAACTCCAATACCTGCCGGTATC-3’及Taq Man探针FAM 5’-TTGTTGATAAAACCCTTCCGGACCAGG-3’BHQ1,采用普通PCR和实时荧光定量PCR,检测其特异性和灵敏度。结果克隆出含GP 1 969~2 113 bp片段的阳性重组质粒p UC57-GP,其浓度为97.75 ng/μl;以p UC57-GP为标准品,制备标准曲线,拷贝数为103~109 copies/μL有较好线性关系,相关系数R~2=0.999;能特异性检测扎伊尔型埃博拉病毒,而与I型登革病毒、寨卡病毒无交叉反应,其检测最低拷贝数达3.10×10~1copies/μl。结论建立了扎伊尔型埃博拉病毒荧光定量PCR快速检测技术,具有快速、灵敏、特异、定量检测等特点,可为埃博拉疫情的综合防控提供技术支撑。
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