三氧化二砷诱导的视网膜母细胞瘤SO-Rb50细胞白噬的研究

来源 :中华实验眼科杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:r57014848
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背景细胞的自噬是肿瘤细胞非凋亡形式的死亡过程,研究证实三氧化二砷(As2O3)可诱导肿瘤细胞凋亡,但As2O3是否可致SO—Rb50细胞发生自噬的研究鲜有报道。目的探讨As2O3体外诱导SO—Rb50细胞自噬的作用。方法用浓度为0.5、1.0、2.0、4.0μmol/L的As2O3培养液及不含As2O3的未处理组处理SO—Rb50细胞系48h,采用MTT法测定各As2O3,浓度组SO—Rb50细胞的吸光度(As2O3)值。构建自噬标志物磷酸化绿色荧光蛋白(pGFP)-LC3体外转染SO—Rb50细胞,并分为新鲜RPMI一1640培养组(未处理组)、As2O3,RPMI一1640培养组(As2O3处理组)和rapamycin培养组(阳性对照组),于48h后行激光共焦显微镜检测细胞自噬;用自噬特异性染料单丹磺酰戊二胺(MDC)行荧光染色检测SO—Rb50细胞的自噬,并用透射电子显微镜检测SO—Rb50细胞的自噬表现,采用流式细胞仪定量检测不同浓度As2O3,处理组自噬泡阳性细胞百分比。结果未处理组和0.5、1.0、2.0、4.0txmolAs2O3,作用48h后SO—Rb50细胞的A570值分别为2.194+0.066、1.841±0.213、1.035±0.046、0.374±0.042和0.167±0.019,总体比较差异有统计学意义(F=547.636,P〈0.05),其中各浓度As2O3组A。值均明显低于未处理组,差异均有统计学意义(均P=0.000)。As2O3处理组和阳性对照组可见GFP—LC3融合蛋白呈点状聚集在相应的自噬泡,未处理组GFP—LC3呈弥散分布。透射电子显微镜检查可见未处理组SO—Rb50细胞超微结构正常,As2O3处理组和阳性对照组见大量双层膜状结构及自噬溶酶体。未处理组48h见极少量MDC阳性荧光颗粒,As2O3处理组及阳性对照组48h可见明显的MDC阳性荧光颗粒,聚集在细胞质相应的自噬发生区。流式细胞术检测发现未处理组和0.5、1.0、2.0、4.0μmol/LAs2O3及rapamycin作用48h后自噬泡阳性的SO—Rb50细胞百分比分别为0、15.6%、42.7%、57.9%、79.5%和89.0%,随As2O3,浓度的增加MDC阳性细胞百分比递增。结论As2O3,抑制SO—Rb50细胞的生长和增生,并致SO—Rb50细胞发生自噬;SO—Rb50细胞经As2O3处理后,自噬的发生早于细胞核的改变,早中期自噬程度呈明显的As2O3浓度依赖性。

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