【摘 要】
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目的 探讨腺病毒载体(Ad-DDAH2)转染大鼠脂肪干细胞(ADSCs)的可行性.方法 构建Ad-DDAH2-GFP质粒.原代培养大鼠ADSCs,流式细胞术检测免疫表型CD29、CD45、CD90表达情况.以不同
【机 构】
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滨州医学院附属医院生殖医学科 山东 滨州 256603;滨州医学院附属医院消化内科 山东 滨州 256603
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目的 探讨腺病毒载体(Ad-DDAH2)转染大鼠脂肪干细胞(ADSCs)的可行性.方法 构建Ad-DDAH2-GFP质粒.原代培养大鼠ADSCs,流式细胞术检测免疫表型CD29、CD45、CD90表达情况.以不同滴度的Ad-DDAH2-GFP转染ADSCs,用荧光显微镜计数转染效率及细胞形态.通过RT-PCR及Western Blot检测DDAH2在ADSCs中的表达情况.结果 Ad-DDAH2-GFP重组腺病毒载体构建、包装成功,且病毒滴度达到2E+10PFU/ML.第4代ADSCs生长曲线呈现“S”形.细胞免疫表型CD29、CD90阳性率分别为(95.83±0.53)％、(91.32±0.27)％,CD45阳性率为(1.59±0.06)％,符合ADSCs免疫表型特征.当病毒感染复数值为80、100时,转染效率均可达到90％以上.但病毒感染复数值为100时,ADSCs出现明显细胞病理现象,因此病毒感染复数值为80被视为最佳感染复数,RT-PCR及Western Blot鉴定可见阳性扩增条带.结论 Ad-DDAH2-GFP重组腺病毒载体构建成功,可以高效转染大鼠ADSCs.DDAH2在mRNA及蛋白稳定长期表达,为后续体内实验奠定了实验基础.
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