【摘 要】
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本试验旨在克隆并表达中国荷斯坦奶牛髓样分化蛋白-2(myeloid differentiation protein-2,MD-2)基因,并用West-ern blotting进行鉴定.采用RT-PCR技术从中国荷斯坦奶牛外周血
【机 构】
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海南大学农学院,山东省农业科学院奶牛中心
【基金项目】
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国家转基因生物新品种培育重大专项;
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本试验旨在克隆并表达中国荷斯坦奶牛髓样分化蛋白-2(myeloid differentiation protein-2,MD-2)基因,并用West-ern blotting进行鉴定.采用RT-PCR技术从中国荷斯坦奶牛外周血白细胞中扩增MD-2 cDNA,并将扩增产物与pMD20-T载体连接,重组质粒经测序鉴定后,构建pET28a-MD-2重组质粒,转化大肠杆菌BL21 (DE3),经IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE和Western blotting分析.结果表明,目的基因含有1个483 bp的开放阅读框,编码161个氨基酸;与黄牛、黑猩猩和小鼠MD-2的cDNA序列同源性分别为99.38％、77.02％、68.12％,氨基酸同源性分别为98.75％、65.00％和58.13％.融合蛋白以包涵体的形式存在,分子质量约为25 ku.说明本研究成功克隆并表达了中国荷斯坦奶牛MD-2 cDNA,为其进一步的功能研究提供了理论依据.
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