【摘 要】
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目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)ENST00000415964是否通过微小RNA(miR)-214/DKK3影响急性白血病细胞的增殖与凋亡.方法 实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测ENST00000415964在急性白血病患者中的表达.在白血病细胞K562中转染pcDNA3.1-ENST00000415964,细胞计数试剂盒(CCK)-8法分析细胞增殖,流式细胞术评估细胞周期和凋亡,Western印迹测定P21、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-3、DKK3蛋白表达
【机 构】
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南京医科大学附属淮安第一医院血液科,江苏 淮安 223300
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目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)ENST00000415964是否通过微小RNA(miR)-214/DKK3影响急性白血病细胞的增殖与凋亡.方法 实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测ENST00000415964在急性白血病患者中的表达.在白血病细胞K562中转染pcDNA3.1-ENST00000415964,细胞计数试剂盒(CCK)-8法分析细胞增殖,流式细胞术评估细胞周期和凋亡,Western印迹测定P21、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-3、DKK3蛋白表达.生物信息学预测和双荧光素酶实验分析ENST00000415964与miR-214的靶向关系.在细胞中共转染pcDNA3.1-ENST00000415964和miR-214,或共转染pcDNA3.1-ENST00000415964和si-DKK3,采用上述方法观察其对细胞增殖、周期、凋亡和P21、Caspase-3、DKK3蛋白表达的影响.生物信息学预测和双荧光素酶实验验证miR-214对DKK3的靶向调控.结果 急性白血病患者ENST00000415964的表达量明显减少(P<0.05).过表达ENST00000415964明显减少细胞K562的存活率、S期细胞百分比,显著增加G0期细胞百分比、细胞凋亡率、Caspase-3和P21蛋白表达量(P<0.05).ENST00000415964靶向、调控miR-214.过表达miR-214或抑制DKK3能减轻ENST00000415964对细胞K562增殖、S期细胞百分比的抑制作用,并减轻其对G0期细胞百分比、细胞凋亡、P21和Caspase-3蛋白表达的促进作用.miR-214靶向调控DKK3.结论 ENST00000415964可抑制急性白血病细胞的增殖、阻滞细胞周期并诱导细胞凋亡,其作用机制与靶向miR-214调控DKK3有关.
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