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目的探讨不同浓度胰蛋白酶联合EDTA和机械刮擦等措施,分离培养的视网膜色素上皮(RPE)细胞并保持细胞膜HLA-DR分子活性的最佳条件.方法常规培养人第3～6代RPE细胞,终浓度为500 U/ml的IFN-γ刺激诱导培养4 d,采取0.125%胰蛋白酶联合0.01%EDTA或机械刮擦等方法分离细胞;台盼蓝拒染活细胞计数;活细胞HLA-DR间接免疫荧光染色,流式细胞术分析;荧光显微镜观察.结果0.125%胰蛋白酶+0.01%EDTA+机械刮擦组分离活细胞率最高;FCM检测HLA-DR免疫荧光染色细胞阳性率,0.125%胰蛋白酶+0.01%EDTA+机械刮擦组、机械刮擦组与对照组存在显著性差异;相对单细胞平均荧光强度,机械刮擦组与0.125%胰蛋白酶+0.01%EDTA+机械刮擦组最高;荧光显微镜下可见机械刮擦组、0.125%胰蛋白酶+0.01%EDTA+机械刮擦组RPE细胞形态保持较好.结论较低浓度胰蛋白酶结合EDTA联合机械刮擦方法能较好地保持RPE细胞膜结构及其糖蛋白的功能状态.