【摘 要】
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目的 探讨靶向磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)p110 β亚单位的短发卡RNA质粒(pU6-Pik3cb-shRNA)对大鼠胸主动脉平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响.方法 构建质粒表达载体pU6-Pik3cb-shRNA-1
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目的 探讨靶向磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)p110 β亚单位的短发卡RNA质粒(pU6-Pik3cb-shRNA)对大鼠胸主动脉平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响.方法 构建质粒表达载体pU6-Pik3cb-shRNA-1和pU6-Pik3cb-shRNA-2,经脂质体介导转染大鼠VSMC,分7组:A组:VSMC细胞;B组:转染质粒pU6-Pik3cb-shRNA-1;C组:转染质粒pU6-Pik3cb-shRNA-2;D组:转染质粒pU6-Pik3cb-shRNA-1和pU6-Pik3cb-shRNA-2各半量;E组:转染阴性对照无序质粒HK;F组:转染阴性对照空质粒;G组:阳性对照渥曼青霉素,应用荧光定量PCR检测VSMC中Pik3cb mRNA的表达,Western blot检测VSMC中PI3K下游蛋白Akt和mTOR表达的变化;CCK-8法检测pU6-Pik3cb-shRNA对大鼠VSMC增殖的影响;免疫荧光法检测各组细胞中PCNA的表达.结果 48 h时B组、C组、D组中Pik3cb mRNA表达分别降低了75.5%、53.6%和65.8%,与对照组相比较,差异有统计学意义(P＜0.05).B组、C组、D组中PI3K下游分子磷酸化Akt和mTOR表达均下调,CCK-8结果显示pU6-Pik3cb-shRNA抑制VSMC的生长,免疫荧光结果显示B组、C组、D组中PCNA的表达明显下调.结论 pU6-Pik3cb-shRNA能够有效下调Pik3cb mRNA和PI3K下游效应分子磷酸化Akt和mTOR的表达,抑制VSMC增殖.
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