电掺入法转染L929细胞和小鼠骨髓细胞

来源 :中华微生物学和免疫学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:icnew
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本文用基因脉冲仪进行电掺入法,转染了小鼠MHC Ⅱ类基因(I-Aαb,I-Aβb)和小鼠变异二氢叶酸还原酶基因于L929细胞和小鼠原代骨髓细胞。本文确定了最佳工作参数组为蔗糖磷酸盐缓冲液、25μFD,250V和PBS,DMEM缓冲液、500µFD,300V。同时用三种方法证明了基因的成功转染:(1)用相应单克隆抗体(抗-I-Ab),检测荧光染色阳性细胞;(2)测定获得抵抗抗叶酸药(MTX)细胞的CFU%数;(3)Southern印迹法分析。最后讨论了电掺入法的实际应用。

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