目的:通过克隆LC3-I基因,体外原核表达LC3-I蛋白后制备抗LC3单克隆抗体,作为自噬研究中的标记分子检测自噬的发生和发展过程。方法:RT-PCR方法从RAW264.7细胞基因组中克隆LC3基因,亚克隆至pQE80L原核表达载体后转化E.coli DH5α进行诱导表达,SDS-PAGE电泳及Western blot鉴定表达蛋白。蛋白纯化后免疫BALB/c小鼠。采用淋巴细胞杂交瘤技术,制备分泌抗LC3-I杂交瘤细胞株,体内诱生腹水制备mAb,间接ELISA法测定其效价,辛酸-硫酸铵沉淀法及亲和层析法纯化mAb。结果:成功克隆了LC3-I基因,并对其在E.coli DH5α进行诱导表达,SDS-PAGE分析表明在相对分子量Mr为20×103有特异条带,Western blot验证表达产物具有一定的生物学活性。建立了3株稳定分泌特异性抗LC3-I mAb的杂交瘤细胞株,诱导产生的腹水获得的抗体效价在105~107之间,结论:在E.coli中对LC3-I进行表达,并制备特异性较强抗LC3-I蛋白的单克隆抗体。为自噬研究提供了良好的标记分子,可对自噬形成和发展进行有效的检测。