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摘要：目的 建立铁箍膏巴布剂的质量控制方法。方法 采用薄层色谱法对大黄、黄连、冰片进行鉴别。采用反相高效液相色谱法对大青叶中的活性成分靛玉红进行含量测定，色谱柱为Symmetry C18柱（4.6 mm×250 mm，5 ?m），以甲醇-水（75∶25）为流动相，流速为1.0 mL/min，检测波长290 nm。结果 薄层色谱法具有良好的重复性、专属性。大青叶在0.012 3～0.123 2 ?g范围内线性关系良好（r=0.999 9，n=5），平均回收率为98.64%，RSD=0.92%（n=6）。结论 本方法简便、准确，可作为铁箍膏巴布剂的质量控制方法。
关键词：铁箍膏巴布剂；质量标准；薄层色谱法；高效液相色谱法
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2012.05.022
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2012）05-0056-03
铁箍膏巴布剂为本院制剂，主要由大青叶、乳香、芙蓉叶、黄柏、大黄、黄连等中药组成，用于腮腺炎、乳腺肿块、乳腺增生、乳腺炎及一切痈疖肿毒。方以大青叶清热解毒；乳香、没药活血散瘀、消肿止痛；黄柏、黄连清热燥湿、泻火解毒；大黄借其通便之力，使热毒下泻，与上药同用，增强其清热解毒之功；芙蓉叶、五倍子消肿排脓，与明矾、胆矾、樟丹共用，有解毒止痒、收敛生肌之功效。为了使患者使用方便，笔者将铁箍膏制备成新型透皮吸收剂——巴布剂，并制定了质量标准。现报道如下。
1 仪器与试药
美国Waters 1525型高效液相色谱仪，Waters 2487紫外检测器，Bree色谱工作站，天津HS6150型超声波清洗器，METTLER AE240电子分析天平。
靛玉红对照品（批号110717-200204）、盐酸小檗碱对照品（批号713-9204）购于中国药品生物制品检定所，对照药材大黄、冰片均由甘肃省中医院中药鉴定室提供。甲醇为色谱纯，水为纯净水，硅胶G（青岛海洋化工厂），其余试剂均为分析纯。铁箍膏巴布剂由甘肃省中医院制剂室生产，批号20100510、20100520、20100530、20100605。
2 薄层鉴别
2.1 大黄
取本品1帖，置锥形瓶中，加适量甲醇，冷浸2 h，滤过，滤液蒸干，残渣加水20 mL，使溶解，滴加盐酸1 mL，置水浴中加热30 min，立即冷却，用乙醚振摇提取2次，每次10 mL，合并乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷1 mL，使溶解，作为供试品溶液。另取大黄对照药材0.5 g，同法制成对照药材溶液。取无大黄的模拟配方，照供试品溶液的制备方法制成空白对照液。照薄层色谱法[2010年版《中华人民共和国药典》（一部）附录ⅥB]试验，吸取上述3种溶液各10 ?L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯-甲酸（12∶4∶0.2）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，空白对照则无相应的斑点[1]22。
2.2 黄连、黄柏
取本品1帖，加氯仿30 mL，水浴加热搅拌，滤过，残渣以少量氯仿分2次洗涤（10、10 mL），挥干氯仿液，残渣连同滤纸置锥形瓶中，加甲醇30 mL，超声处理20 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 mL，作为供试品溶液。另取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每毫升含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。取无黄连、黄柏的模拟配方，照供试品溶液的制备方法制得空白对照液。照薄层色谱法[2010年版《中华人民共和国药典》（一部）附录ⅥB]试验，吸取上述3种溶液各5 ?L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水（7∶1∶2）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯下，检视。供试品色普中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点[1]285[2]52。
2.3 冰片
取本品1帖，置烧瓶中加入适量乙醇，置水浴上回流1 h，滤过，滤液作为供试品溶液。另取冰片对照品适量，加醋酸乙酯制成每毫升含1 mg的溶液，作为对照品溶液。取无冰片的模拟配方，照供试品溶液的制备方法制得空白对照液。照薄层色谱法[2010年版《中华人民共和国药典》（一部）附录ⅥB]试验，吸取上述3种溶液各10 ?L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯（19∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%香草醛-浓硫酸溶液，于110 ℃加热至斑点显色清晰。在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。空白对照则无相应的斑点[1]136[2]609。
3 含量测定
3.1 系统适用性试验
色谱柱：Symmetry C18柱（5 ?m，4.6 mm×250 mm）；流动相：甲醇-水（75∶25）；流速：1.0 mL/min；柱温：室温；检测波长：290 nm。
3.2 对照品溶液的制备
取靛玉红对照品适量，加三氯甲烷制成每毫升含6.160 ?g的溶液，作为对照品溶液。
3.3 供试品溶液的制备
取本品2帖，置具塞锥形瓶中，精密加入三氯甲烷20 mL，密塞，称定重量，加热回流2 h，放冷，再称定重量，用三氯甲烷补足减失重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液5 mL，蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，转移至10 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液[1]20[3-4]。
3.4 阴性对照试验
按样品处方比例制备不含大青叶药材的样品，按样品含量测定项下方法制成阴性对照溶液。吸取以上3种溶液各10 ?L，按上述色谱条件进行测定，结果阴性样品无干扰。见图1。
3.5 线性关系考察 3.6 精密度试验
精密吸取同一对照品溶液10 ?L，重复进样5次，计算靛玉红峰面积，RSD=0.84%，表明精密度良好。
3.7 稳定性试验
精密吸取新鲜配制的供试品溶液，每隔2 h测定1次，连续测定6次，计算靛玉红峰面积，RSD=2.50%，表明供试品在12 h内稳定性较好。
3.8 重复性试验
取同一批号铁箍膏巴布剂（20100520）5份，分别按样品测定法测定，结果平均含量为0.028 6 mg/帖，RSD=1.58%。
3.9 加样回收率试验
取已知含量（批号20100510）的本品6帖，分别加入靛玉红对照品适量，按“3.3”项下方法制备供试液并测定含量，计算回收率，结果见表1。
3.10 样品含量测定
取供试品，按“3.3”项下方法制备供试液，按上述色谱条件进行测定，另取“3.2”项下对照品溶液10 ?L。同法测定，记录色谱图，测定峰面积，以外标法计算样品中靛玉红的含量，结果见表2。
4 讨论
大黄主要有效成分为大黄素、大黄酚、大黄酸、大黄素甲醚，具有抗菌、消炎止痛之功效，笔者参照药典大黄中有效成分的提取方法，采用乙醚提取比较完全，以正己烷-醋酸乙酯-甲酸为展开剂，展开后，在荧光下斑点清晰，无干扰。点样量以5 ?L为宜。
黄连、黄柏主要成分为盐酸小檗碱，具有消炎止痛功效。本试验以正丁醇-冰醋酸-水为展开剂，展开后，斑点清晰，阴性无干扰。点样量以10 ?L为适宜。
取靛玉红对照品溶液，在200～400 nm波长范围内进行扫描，结果显示，靛玉红在290 nm处有最大吸收。
在选择靛玉红提取方法时，本试验参照《中华人民共和国药典》及文献，采用甲醇、氯仿作为溶剂超声提取或甲醇、氯仿加热回流，测定结果表明以甲醇、氯仿为溶剂加热回流提取2 h，提取效率较高，干扰成分少。
试验结果表明，本法操作简便，分离度好、专属性强、重复性良好，可以作为控制铁箍膏巴布剂的质量标准。
参考文献：
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010.
[2] 刘训红，王玉玺，房克慧，等.中药材薄层色谱鉴别[M].天津：天津科学技术出版社，1990.
[3] 赵俊生.反向高效液相色谱法测定中药洗鼻液中靛玉红的含量[J].山西医药杂志，2011，40（1）：74
[4] 许秀娟，谢秉湘，李志梅.高效液相色普法测定金莲清热泡腾片中靛玉红的含量[J].海峡药学，2011，23（2）：39-40.
（收稿日期：2011-12-28，编辑：陈静）
关键词：铁箍膏巴布剂；质量标准；薄层色谱法；高效液相色谱法
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2012.05.022
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2012）05-0056-03
铁箍膏巴布剂为本院制剂，主要由大青叶、乳香、芙蓉叶、黄柏、大黄、黄连等中药组成，用于腮腺炎、乳腺肿块、乳腺增生、乳腺炎及一切痈疖肿毒。方以大青叶清热解毒；乳香、没药活血散瘀、消肿止痛；黄柏、黄连清热燥湿、泻火解毒；大黄借其通便之力，使热毒下泻，与上药同用，增强其清热解毒之功；芙蓉叶、五倍子消肿排脓，与明矾、胆矾、樟丹共用，有解毒止痒、收敛生肌之功效。为了使患者使用方便，笔者将铁箍膏制备成新型透皮吸收剂——巴布剂，并制定了质量标准。现报道如下。
1 仪器与试药
美国Waters 1525型高效液相色谱仪，Waters 2487紫外检测器，Bree色谱工作站，天津HS6150型超声波清洗器，METTLER AE240电子分析天平。
靛玉红对照品（批号110717-200204）、盐酸小檗碱对照品（批号713-9204）购于中国药品生物制品检定所，对照药材大黄、冰片均由甘肃省中医院中药鉴定室提供。甲醇为色谱纯，水为纯净水，硅胶G（青岛海洋化工厂），其余试剂均为分析纯。铁箍膏巴布剂由甘肃省中医院制剂室生产，批号20100510、20100520、20100530、20100605。
2 薄层鉴别
2.1 大黄
取本品1帖，置锥形瓶中，加适量甲醇，冷浸2 h，滤过，滤液蒸干，残渣加水20 mL，使溶解，滴加盐酸1 mL，置水浴中加热30 min，立即冷却，用乙醚振摇提取2次，每次10 mL，合并乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷1 mL，使溶解，作为供试品溶液。另取大黄对照药材0.5 g，同法制成对照药材溶液。取无大黄的模拟配方，照供试品溶液的制备方法制成空白对照液。照薄层色谱法[2010年版《中华人民共和国药典》（一部）附录ⅥB]试验，吸取上述3种溶液各10 ?L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯-甲酸（12∶4∶0.2）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，空白对照则无相应的斑点[1]22。
2.2 黄连、黄柏
取本品1帖，加氯仿30 mL，水浴加热搅拌，滤过，残渣以少量氯仿分2次洗涤（10、10 mL），挥干氯仿液，残渣连同滤纸置锥形瓶中，加甲醇30 mL，超声处理20 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 mL，作为供试品溶液。另取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每毫升含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。取无黄连、黄柏的模拟配方，照供试品溶液的制备方法制得空白对照液。照薄层色谱法[2010年版《中华人民共和国药典》（一部）附录ⅥB]试验，吸取上述3种溶液各5 ?L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水（7∶1∶2）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯下，检视。供试品色普中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点[1]285[2]52。
2.3 冰片
取本品1帖，置烧瓶中加入适量乙醇，置水浴上回流1 h，滤过，滤液作为供试品溶液。另取冰片对照品适量，加醋酸乙酯制成每毫升含1 mg的溶液，作为对照品溶液。取无冰片的模拟配方，照供试品溶液的制备方法制得空白对照液。照薄层色谱法[2010年版《中华人民共和国药典》（一部）附录ⅥB]试验，吸取上述3种溶液各10 ?L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯（19∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%香草醛-浓硫酸溶液，于110 ℃加热至斑点显色清晰。在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。空白对照则无相应的斑点[1]136[2]609。
3 含量测定
3.1 系统适用性试验
色谱柱：Symmetry C18柱（5 ?m，4.6 mm×250 mm）；流动相：甲醇-水（75∶25）；流速：1.0 mL/min；柱温：室温；检测波长：290 nm。
3.2 对照品溶液的制备
取靛玉红对照品适量，加三氯甲烷制成每毫升含6.160 ?g的溶液，作为对照品溶液。
3.3 供试品溶液的制备
取本品2帖，置具塞锥形瓶中，精密加入三氯甲烷20 mL，密塞，称定重量，加热回流2 h，放冷，再称定重量，用三氯甲烷补足减失重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液5 mL，蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，转移至10 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液[1]20[3-4]。
3.4 阴性对照试验
按样品处方比例制备不含大青叶药材的样品，按样品含量测定项下方法制成阴性对照溶液。吸取以上3种溶液各10 ?L，按上述色谱条件进行测定，结果阴性样品无干扰。见图1。
3.5 线性关系考察 3.6 精密度试验
精密吸取同一对照品溶液10 ?L，重复进样5次，计算靛玉红峰面积，RSD=0.84%，表明精密度良好。
3.7 稳定性试验
精密吸取新鲜配制的供试品溶液，每隔2 h测定1次，连续测定6次，计算靛玉红峰面积，RSD=2.50%，表明供试品在12 h内稳定性较好。
3.8 重复性试验
取同一批号铁箍膏巴布剂（20100520）5份，分别按样品测定法测定，结果平均含量为0.028 6 mg/帖，RSD=1.58%。
3.9 加样回收率试验
取已知含量（批号20100510）的本品6帖，分别加入靛玉红对照品适量，按“3.3”项下方法制备供试液并测定含量，计算回收率，结果见表1。
3.10 样品含量测定
取供试品，按“3.3”项下方法制备供试液，按上述色谱条件进行测定，另取“3.2”项下对照品溶液10 ?L。同法测定，记录色谱图，测定峰面积，以外标法计算样品中靛玉红的含量，结果见表2。
4 讨论
大黄主要有效成分为大黄素、大黄酚、大黄酸、大黄素甲醚，具有抗菌、消炎止痛之功效，笔者参照药典大黄中有效成分的提取方法，采用乙醚提取比较完全，以正己烷-醋酸乙酯-甲酸为展开剂，展开后，在荧光下斑点清晰，无干扰。点样量以5 ?L为宜。
黄连、黄柏主要成分为盐酸小檗碱，具有消炎止痛功效。本试验以正丁醇-冰醋酸-水为展开剂，展开后，斑点清晰，阴性无干扰。点样量以10 ?L为适宜。
取靛玉红对照品溶液，在200～400 nm波长范围内进行扫描，结果显示，靛玉红在290 nm处有最大吸收。
在选择靛玉红提取方法时，本试验参照《中华人民共和国药典》及文献，采用甲醇、氯仿作为溶剂超声提取或甲醇、氯仿加热回流，测定结果表明以甲醇、氯仿为溶剂加热回流提取2 h，提取效率较高，干扰成分少。
试验结果表明，本法操作简便，分离度好、专属性强、重复性良好，可以作为控制铁箍膏巴布剂的质量标准。
参考文献：
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010.
[2] 刘训红，王玉玺，房克慧，等.中药材薄层色谱鉴别[M].天津：天津科学技术出版社，1990.
[3] 赵俊生.反向高效液相色谱法测定中药洗鼻液中靛玉红的含量[J].山西医药杂志，2011，40（1）：74
[4] 许秀娟，谢秉湘，李志梅.高效液相色普法测定金莲清热泡腾片中靛玉红的含量[J].海峡药学，2011，23（2）：39-40.
（收稿日期：2011-12-28，编辑：陈静）