【摘 要】
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目的 构建定位表达于细胞不同部位的新城疫病毒HN(hemagglutinin-neuraminidase)基因.方法 应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,以新城疫病毒D90株RNA为模板,分别扩增出含有
【机 构】
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哈尔滨医科大学附属肿瘤医院内科,哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点空对空/猪病研究室
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目的 构建定位表达于细胞不同部位的新城疫病毒HN(hemagglutinin-neuraminidase)基因.方法 应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,以新城疫病毒D90株RNA为模板,分别扩增出含有HN基因全长和不含终止子的HN基因片段,将克隆的HN基因片段经双酶切后定向插入真核表达质粒pcDNA3.1(+)中,经过定向插入组织凝血酶原激活物(tPA)的前导序列和/或A型流感病毒血凝素(HA)基因跨膜区(TM)片段进行修饰分别构建胞浆型、跨模型和分泌型DNA质粒.结果 所有重组质粒经酶切和测序鉴定插入正确.经过体外转染真核细胞,间接免疫荧光和SDS-PAGE蛋白质电泳检测,证明构建的新城疫病毒HN基因定位表达于真核细胞的胞浆、胞膜和细胞外.结论 成功构建了定位DOI:10.3760/cma.j.issn.1673-4394.2009.04.003作者单位:150040,哈尔滨医科大学附属肿瘤医院内科(隋红,李乐静,白玉贤);150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪病研究室(李曦,张永欣,肖晶,符芳)通信作者:李曦,E-mail:lx2005@126.com表达于细胞不同部位的HN蛋白的DNA质粒即胞浆型、跨模型和分泌型.
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