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目的 构建针对小鼠BAG-1(Bcl-2-associated athanogene 1)基因的短发卡RNA(shRNA)真核表达质粒,探讨其对小鼠黑素瘤B16F10细胞BAG-1基因表达的抑制作用.方法 以小鼠BAG-1mRNA编码区作为RNA干扰靶点,构建shRNA真核表达质粒pRNAT-U6.1/Neo-BAG-1,应用lipofectaminTM2000转染小鼠黑素瘤B16F10细胞,设阴性对照组(转染阴性对照质粒Neg)和空白对照组(未转染),转染后48 h开始G418筛选.转染1个月后采用RT-PCR、蛋白质印迹检测BAG-1基因的表达.结果 酶切及测序结果证实,重组质粒pRNAT-U6.1/Neo-BAG-1构建成功.质粒在B16F10细胞的转染效率为20%～30%.阴性对照组细胞BAG-1基因表达与空白对照组无差异,shRNA质粒处理组细胞BAG-1基因表达较空白对照组显著下降(P<0.05),表达抑制率在mRNA和蛋白水平分别为77%±4%和62%±2%.结论 针对小鼠BAG-1基因的shRNA真核表达质粒pRNAT-U6.1/Neo-BAG-1能高效特异地抑制小鼠黑素瘤B16F10细胞BAG-1基因的表达。