猪链球菌真核样丝氨酸/苏氨酸激酶stk基因敲除株的构建

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目的构建猪链球菌(Streptococcus suis,S.suis)2型强毒株05ZYH33真核样丝氨酸/苏氨酸激酶(eukaryotic—likeSer/Thr kinase,eSTK)stk基因敲除突变株。方法构建中间为壮观霉素抗性基因(Spc’),两侧为stk编码基因上下游同源序列的基因敲除质粒,通过同源重组筛选stk编码基因敲除突变株。结果组合PCR分析和基因测序结果均显示stk编码基因完全被壮观霉素抗性基因替代,基因敲除突变株△stk构建成功。逆转录PCR(RT—PCR)证实了stk在转录水平
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