【摘 要】
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目的探讨kinectin蛋白在真核细胞的定位,并建立kinectin抗体免疫荧光检测方法(IFA).方法从人喉癌上皮细胞(HepG2)抽提RNA,用逆转录聚合酶链反应扩增kinectin编码区序列,并连
【机 构】
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南京军区福州总医院风湿科,上海市风湿病研究所
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目的探讨kinectin蛋白在真核细胞的定位,并建立kinectin抗体免疫荧光检测方法(IFA).方法从人喉癌上皮细胞(HepG2)抽提RNA,用逆转录聚合酶链反应扩增kinectin编码区序列,并连接到真核表达载体pEGFP-C2中;将构建的pEGFP-kinectin载体导入HepG2细胞中,在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(GFP)的荧光及其细胞定位.然后,用此转染细胞制成的底片,建立检测kinectin抗体的IFA.同时用IFA对51名正常人及46例白塞病(BD)患者血清进行初步检测.结果经EcoRI单酶切和测序证实,成功地构建了表达kinectin的真核表达载体; pEGFP-kinectin载体转染的细胞经3次克隆筛选后,100%的细胞胞浆内发出特征性荧光.用kinectin抗体阳性血清染色,也得到类似特征的荧光.IFA检测显示,BD患者kinectin抗体的阳性率为32.7%(15/46),正常人均为阴性.结论构建kinectin表达的载体可在HepG2细胞中进行表达,并成功地用pEGFP-kinectin转染的HepG2细胞建立了检测kinectin抗体的IFA.
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