【摘 要】
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目的 构建针对婆罗双树样基因4(SALL4)的特异性shRNA干扰载体,并转染THP-1细胞,以期为更深入了解SALLA对白血病的作用,为后续研究提供实验工具.方法 设计4条针对不同靶点的SA
【机 构】
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华中科技大学同济医学院附属同济医院血液内科
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目的 构建针对婆罗双树样基因4(SALL4)的特异性shRNA干扰载体,并转染THP-1细胞,以期为更深入了解SALLA对白血病的作用,为后续研究提供实验工具.方法 设计4条针对不同靶点的SALL4特异性siRNA和一条阴性干扰siRNA,分子克隆方法构建pGPU6/GFP/Neo/SALIAshRNA干扰载体,转染THP-1细胞,比较未转染细胞、阴性干扰转染细胞和4条SALL4 shRNA转染细胞的SALL4表达情况,找出干扰效果最好的SALL4 shRNA.结果 4种SALL4 shRNA均能有效转染THP-1细胞,实时定量PCR(RT-PCR)与Western blotting结果均显示针对靶点mRNA-1122的pGPU6/GFP/Neo/SALL4 shRNA-B干扰效果最佳,SALL4表达减少量最多(P
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