目的:建立重组人乙酰胆碱酯酶（rhAChE）抑制剂体外筛选模型,并应用该模型对中药单体进行抑制剂的初步筛选。方法:运用pCMV-AChE表达质粒转染HEK293细胞,通过DEAE-Sepharose FF柱纯化酶液,获得更高纯度和活性的纯化酶,并建立其活性检测方法,同时结合SDS-PAGE及Western blot验证模型成功与否;以AChE的可逆性抑制剂多奈哌齐为阳性药,运用该模型探究小檗碱、血根碱和蛇根碱对AChE的影响。结果:纯化液比活力为15.93 U·mg-1,纯化倍数为9.63,酶活回收率为56%;Western blot结果显示在68×103 g·mol^-1附近出现明显的rh ACh E的单一条带;测得纯化后rh ACh E的IC50为5.0 nmol·L^-1,明显低于纯化前(14 nmol·L^-1);3个不同的化合物对rhAChE分别表现出不同程度的抑制作用,其中小檗碱的IC50接近多奈哌齐。结论:SDS-PAGE、Western blot以及多奈哌齐的阳性结果显示利用pCMV-AChE转染的HEK293细胞成功构建rhAChE抑制剂体外筛选模型,并成功运用于中药单体药物的初筛。