【摘 要】
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为探究影响美国白蛾几丁质脱乙酰酶(hccda5)基因在原核细胞中表达的因素,以pMD19-T-hccda5重组质粒为模板,通过PCR技术获得hccda5基因全长,与载体连接并转化BL21(DE3)构建工
【机 构】
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河北农业大学植物保护学院/河北省农作物病虫害生物防治工程技术中心,北京农学院植物科学技术学院
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为探究影响美国白蛾几丁质脱乙酰酶(hccda5)基因在原核细胞中表达的因素,以pMD19-T-hccda5重组质粒为模板,通过PCR技术获得hccda5基因全长,与载体连接并转化BL21(DE3)构建工程菌,探索载体、IPTG浓度、培养温度、诱导时间等条件对目的蛋白表达的影响。结果表明:pET28a-hccda5在16℃诱导过夜时,目的蛋白表达量大,载体种类对基因表达有一定影响;IPTG浓度和温度对目的基因表达基本无影响;诱导时间在不同温度条件下对基因表达影响不同。本研究成功构建了hccda5基因工程菌,实现了其在原核细胞中的表达,初步确定了影响其表达的因素,为真核基因在原核细胞中的表达提供了实验依据。
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