双酚A亚急性染毒对小鼠造血功能的实验方案

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  [摘要]双酚A(bisphenol A,BPA) 是酚类化合物中具代表性的一类环境雌激素污染物。多应用于食品和饮料碳酸聚酯包装材料、牙齿固封剂、金属罐头树脂内膜等,能够模拟和干扰动物体内雌激素的正常代谢和生理活动。但目前,含双酚A的塑料容器,在世界上绝大多数国家包括中国在内都在正常使用。人们忽视了双酚A的危害。因此,对双酚A危害的研究意义重大。
  [关键词]双酚A 类环境雌激素 危害
  [中图分类号]R965 [文献标识码]A [文章编号]1009-5349(2013)08-0104-01
  一、國内外对于双酚A的研究现状
  目前,国内外对于双酚A的毒性研究资料,主要为动物实验调查研究。例如,研究表明雪貂对双酚A非常敏感,有时持续性发情就会导致骨髓细胞再生不良;犬对双酚A也比较敏感,使用不当会导致严重的再生障碍性贫血,甚至患睾丸支持细胞肿瘤的雄犬也有发生再生障碍性贫血的记录。啮齿类动物注射双酚A可引起血液学改变,猫则表现出很强的雌激素毒性耐受性。[1]更有资料显示双酚A具有一定的胚胎毒性和致畸性,可明显增加动物卵巢癌、前列腺癌、白血病等癌症的发生。
  研究发现双酚A属于低毒性化学物。通常情况下,双酚A对皮肤、角膜、消化道和呼吸道具有中等强度刺激性,对鼠类具发育毒性。动物试验发现双酚A具有模拟雌激素代谢的效果,即使是极低的剂量也能使动物产生早熟、前列腺增长、精子数目下降等作用。
  二、国内外双酚A使用现状
  直至目前,一些国家已经对双酚A采取了限制措施:
  挪威:最早将双酚A纳入受限物质的应是原定于2008年1月1日生效,后因许多议题尚未达成共识而延期的挪威PoHS指令,在其对消费性产品中的禁止使用的10种物质中就包括双酚A(BPA)。
  美国:2009年3月份提案禁止在“可重复使用的食品容器”和“其他食品容器”中使用(BPA)。这一禁令在正式通过180天后开始生效。
  中国:2011年5月30日,卫生部等6部门对外发布公告称,鉴于婴幼儿属于敏感人群,为防范食品安全风险,保护婴幼儿健康,禁止双酚A用于婴幼儿奶瓶。
  但是最近的研究发现,有超过90%的美国人体尿样中检测到了双酚A[2],这意味着双酚A仍在被大量使用。双酚A对健康有害已经是一个不言自明的结论,但大部分人一直以为:日常生活环境中人们接触的双酚A浓度很低,不足以构成对人体的危害。在这样的认识下,双酚A被人们广泛应用。
  三、实验设计方案
  (一)实验动物
  28日龄健康的清洁级ICR小鼠,体重18-23g,雌性小鼠15只,雄性小鼠15只,共30只。
  (二)实验试剂和药品
  双酚A:金龙鱼花生油。
  (三)实验器材
  1ml注射器;小鼠灌胃针头,冷冻离心机,冰箱,Sysmex F-820半自动血细胞分析仪测定。
  (四)实验步骤
  用金龙鱼花生油将BPA配置成0.012mg/ml,0.12mg/ml两种浓度的溶液,小鼠的灌胃体积为0.1ml/30g/bw,每日上午7点15分灌胃。
  将小鼠雌雄分笼喂养,昼夜12小时交替,室温控制在18℃-22℃,湿度控制在50%-60%,食物与水可以自由摄取。待小鼠适应1周后,把雄鼠随机分为40、400μg/kg/dayBPA剂量染毒组和对照组,每组雄鼠5只;同时雌鼠随机分为40、400μg/kg/day BPA剂量染毒组和对照组,每组雌鼠5只。从第2周开始灌胃染毒,染毒持续30天,对照组(n=10)灌胃溶媒花生油,灌胃体积与时间同染毒组。染毒结束后,处死动物颈动脉采血,肝素抗凝,4℃保存备用,检测指标采用Sysmex F-820半自动血细胞分析仪测定,严格按仪器说明书操作。
  (五)检测指标
  1.小鼠血液红细胞系各项指标检测:红细胞计数(RBC)、血红蛋白(HGB)、红细胞压积(HCT)、红细胞的平均体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白量(MCH)、红细胞平均血红蛋白浓度(MCHC)、红细胞分布宽度变异系数(RDW-CV)。
  2.小鼠血液白细胞系各项指标检测:白细胞计数(WBC)、淋巴细胞百分比(W-SCR)、中性粒细胞比率(W-LCR)、淋巴细胞绝对值(W-SCC)、中性粒细胞绝对值(W-LCC)。
  3.小鼠血液血小板系各项指标检测:血小板量(PLT)、血小板分布宽度(PDW)、平均血小板体积(MPV)。
  (六)统计学分析
  采用SPSS 10.0统汁软件进行分析,组间比较采用方差分析,P<0.05差异有统计学意义。
  【参考文献】
  [1]秦清明,程浩,雷嘉耀,李德如,黄群山.外源性雌二醇对犬骨髓造血机能的影响.中国兽医杂志,2010,46(3).
  [2]田栋.青春期至成年早期双酚A暴露对小鼠行为的影响及其分子机制[D].浙江师范大学,2011.
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