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【摘 要】 目的 建立痔炎消片中绿原酸的含量测定方法 。方法 采用HPLC法，以乙腈-0.4%磷酸溶液（13：87）为流动相，检测波长为327nm。结果 通过方法学考察，绿原酸在0.054～1.355？g的范围内，分别与峰面积呈良好的线性关系。平均回收率为99.13%，RSD为0.61%。结论 该方法操作简单，重复性好，可用于评价痔炎消颗粒中金银花的质量。
【关键词】 痔炎消片 绿原酸 HPLC
【中图分类号】 R445 【文献标识码】 A 【文章编号】 1671-5160（2014）10-0321-01
1 仪器与试药
WATERS-515高效液相色谱仪，WATERS 2998 Photodiode Array Detector检测器组成。对照品绿原酸（110736-201337，购自中国药品生物制品检定所）；痔炎消片（马应龙药业集团股份有限公司，批号为130301、130402，131202），乙腈为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件系统及系统适用性实验
色谱柱：DIKMA （Diamosil C18，5μm 250×4.6mm）；流动相：乙腈-0.4%的磷酸溶液（13：87）[1-3]；流速1.0mL？min-1.在上述色谱条件下，理论板数按绿原酸记不得低于1000.
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液。精密称绿原酸对照品0.05420g，置100ml容量瓶中，加入甲醇使溶解，并稀释至刻度，精密量取1 ml，置100ml的容量瓶中，甲醇定容做为对照品溶液。
2.2.2 供试品溶液。取本品内容物10.0g，研细，取约0.5g，精密成定，置100ml的容量瓶中，加入50%甲醇溶液超声处理25分钟定容，滤过，取续滤液即得。
2.3 方法学验证
2.3.1 专属性考察。对照品溶液和供试品溶液，在上述色谱条件下测定，样品中主峰保留时间和对照品主峰保留时间一直，无干扰。
2.3.2 线性关系考察。分别精密量取浓度为C=0.0542mg/ml 的对照品储备溶液1μl，5μl，10μl，20μl，25μl注入液相色谱仪中，测定峰面积，以进样量为横坐标，色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程为：Y=3051617.7X-4337，r=0.9998.由测定结果表明在此范围内线性关系良好。
2.3.3 精密度实验。精密吸取对照品溶液10μl，连续进样6次，以峰面积进行计算RSD为0.11%，仪器精密度良好。
2.3.4 稳定性实验。取本品（批号为），精密称取0.5g，按“2.2.2”项下制備供试品，精密量取10μl，按0，2，4，6，8，10，24小时间隔进样，测定色谱峰面积RSD为0.21%，表明在室温放置24小时内基本稳定。
2.3.5 重复性实验。取本品（批号130301），精密量取0.5g，共6份，按该方法制备，测定色谱峰面积，含量的平均值RSD为2.0%。重复性良好。
2.3.6 回收率实验。取已知含量的本品（批号为110753-200212，绿原酸含量为5.10 mg？g -1，分别精密加入绿原酸对照品（C=50.1μg /ml）5ml，超声处理25分钟。按2.2.2项下制备供试品溶液。精密吸取10μl，注入液相色谱仪。绿原酸的回收率均值为99.12%，RSD为0.94%，符合有关规定。见表一.
2.4 样品测定
经采用“2.2.2”项下方法，测定3批样品中绿原酸的含量，测定结果见表2.
3 讨论
3.1 流动相的选择
本实验采用不同比例的乙腈-0.4%磷酸水溶液，甲醇-0.4%磷酸水溶液，进行比较，结果发现在327nm检测时，甲醇的末端吸收影响检测的准确度，所以选择乙腈-0.4%磷酸水溶液。
3.2 小结
本品是中药成方制剂，但质量标准缺少对绿原酸的定量测定，未能有效的控制本制剂的质量，本方法样品处理简便，方法准确，可为该制剂定新的检测方法与质量标准提供参考价值.
参考文献
[1] 杜英峰，张兰桐，靳怡然.多波长RP-HPLC法测定双黄连口服液中黄芩苷、绿原酸和连翘苷[J]中成药，2009，31（9）：1368-1371
[2]梁建成，黄义昆，谢玲.高效液相色谱法同时测定注射用双黄连中绿原酸的含量[J]中国药师，2008，11（11）：1386-1387
[3]中国药典[s].2010；205-206
【关键词】 痔炎消片 绿原酸 HPLC
【中图分类号】 R445 【文献标识码】 A 【文章编号】 1671-5160（2014）10-0321-01
1 仪器与试药
WATERS-515高效液相色谱仪，WATERS 2998 Photodiode Array Detector检测器组成。对照品绿原酸（110736-201337，购自中国药品生物制品检定所）；痔炎消片（马应龙药业集团股份有限公司，批号为130301、130402，131202），乙腈为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件系统及系统适用性实验
色谱柱：DIKMA （Diamosil C18，5μm 250×4.6mm）；流动相：乙腈-0.4%的磷酸溶液（13：87）[1-3]；流速1.0mL？min-1.在上述色谱条件下，理论板数按绿原酸记不得低于1000.
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液。精密称绿原酸对照品0.05420g，置100ml容量瓶中，加入甲醇使溶解，并稀释至刻度，精密量取1 ml，置100ml的容量瓶中，甲醇定容做为对照品溶液。
2.2.2 供试品溶液。取本品内容物10.0g，研细，取约0.5g，精密成定，置100ml的容量瓶中，加入50%甲醇溶液超声处理25分钟定容，滤过，取续滤液即得。
2.3 方法学验证
2.3.1 专属性考察。对照品溶液和供试品溶液，在上述色谱条件下测定，样品中主峰保留时间和对照品主峰保留时间一直，无干扰。
2.3.2 线性关系考察。分别精密量取浓度为C=0.0542mg/ml 的对照品储备溶液1μl，5μl，10μl，20μl，25μl注入液相色谱仪中，测定峰面积，以进样量为横坐标，色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程为：Y=3051617.7X-4337，r=0.9998.由测定结果表明在此范围内线性关系良好。
2.3.3 精密度实验。精密吸取对照品溶液10μl，连续进样6次，以峰面积进行计算RSD为0.11%，仪器精密度良好。
2.3.4 稳定性实验。取本品（批号为），精密称取0.5g，按“2.2.2”项下制備供试品，精密量取10μl，按0，2，4，6，8，10，24小时间隔进样，测定色谱峰面积RSD为0.21%，表明在室温放置24小时内基本稳定。
2.3.5 重复性实验。取本品（批号130301），精密量取0.5g，共6份，按该方法制备，测定色谱峰面积，含量的平均值RSD为2.0%。重复性良好。
2.3.6 回收率实验。取已知含量的本品（批号为110753-200212，绿原酸含量为5.10 mg？g -1，分别精密加入绿原酸对照品（C=50.1μg /ml）5ml，超声处理25分钟。按2.2.2项下制备供试品溶液。精密吸取10μl，注入液相色谱仪。绿原酸的回收率均值为99.12%，RSD为0.94%，符合有关规定。见表一.
2.4 样品测定
经采用“2.2.2”项下方法，测定3批样品中绿原酸的含量，测定结果见表2.
3 讨论
3.1 流动相的选择
本实验采用不同比例的乙腈-0.4%磷酸水溶液，甲醇-0.4%磷酸水溶液，进行比较，结果发现在327nm检测时，甲醇的末端吸收影响检测的准确度，所以选择乙腈-0.4%磷酸水溶液。
3.2 小结
本品是中药成方制剂，但质量标准缺少对绿原酸的定量测定，未能有效的控制本制剂的质量，本方法样品处理简便，方法准确，可为该制剂定新的检测方法与质量标准提供参考价值.
参考文献
[1] 杜英峰，张兰桐，靳怡然.多波长RP-HPLC法测定双黄连口服液中黄芩苷、绿原酸和连翘苷[J]中成药，2009，31（9）：1368-1371
[2]梁建成，黄义昆，谢玲.高效液相色谱法同时测定注射用双黄连中绿原酸的含量[J]中国药师，2008，11（11）：1386-1387
[3]中国药典[s].2010；205-206