循环牵拉对大鼠跟腱来源肌腱干细胞c-fos基因表达的影响

来源 :中国修复重建外科杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:bjkhs
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目的探讨机械刺激对大鼠跟腱来源肌腱干细胞(tendon stem cells,TSCs)立早基因c-fos表达的影响。方法取8周龄雄性SD大鼠跟腱组织,用酶消化法分离、培养TSCs,取第3代细胞用于实验。利用单拉循环牵伸载荷模型在1 Hz条件下,分别用4%和8%牵拉强度牵拉细胞,并在牵拉0、5、15、30、60、120 min后收集细胞进行实时荧光定量PCR检测,观察c-fos m RNA相对表达量随牵拉时间的变化,并找到表达最高时间点Tmax。然后分别用2%、4%、6%、8%和12%的牵拉强度,在牵拉Tmax时收集细胞,观察c-fos m RNA相对表达量随牵拉强度的变化。接着分别用2%、4%、6%、8%和12%的牵拉强度,对TSCs经0、5、15 min短时间牵拉后静置至Tmax,观察c-fos m RNA相对表达量经短时刺激后的变化情况。最后分别用4%和8%牵拉强度牵拉细胞0、Tmax、120 min,检测成肌腱分化标志基因Ⅰ型胶原、腱调蛋白(tenomodulin,TNMD),成骨分化标志基因Runx2、远端缺失基因5(distal-less homeobox 5,Dlx5),成脂肪分化标志基因脂肪酸结合蛋白4(fatty acid binding protein 4,FABP4)的表达情况。结果与0 min相比,在4%和8%牵拉强度下,c-fos m RNA相对表达量在牵拉15 min时显著升高(P<0.05),30 min时出现峰值(P<0.05),至60 min时表达量恢复至起始水平(P>0.05);故Tmax为30 min。牵拉30 min时,2%的牵拉强度即可使c-fos m RNA相对表达量升高,且6%、8%和12%牵拉强度较2%、4%牵拉强度进一步升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。经过5 min的短时间牵拉,并静置至30 min时即可使c-fos m RNA相对表达量升高(P<0.05)。4%牵拉强度下,在牵拉30 min和120 min时,各分化标志基因相对表达量与0 min比较差异均无统计学意义(P>0.05);而8%牵拉强度下,在牵拉30 min时,Runx2基因相对表达量显著升高,在牵拉120 min时,Ⅰ型胶原、TNMD、Dlx5、Runx2等基因相对表达量均升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论循环牵拉能够影响大鼠跟腱来源TSCs立早基因c-fos的m RNA表达,并且呈时间和强度依赖性;提示机械刺激的时间和强度可能在作用早期即对TSCs的分化产生影响,对进一步研究TSCs机械-细胞内信号耦联机制具有重要意义。
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