【摘 要】
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目的 采用293T细胞表达重组腺病毒5型（recombinant adenovirus 5,rAd5）-诺如病毒（Norovirus,NoV）GⅡ.4型-VP1病毒样颗粒（virus-like particle,VLP），并进行鉴定。方法 将重组腺病毒质粒pAd5-eGFP及pAd5-NoV-GⅡ.4-VP1分别转染293T细胞，拯救获得重组腺病毒rAd5-eGFP和rAd5-NoV-GⅡ.4-V
【基金项目】
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国家重点研发计划（2020YFC0842100,2020YFC0860600）；
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目的 采用293T细胞表达重组腺病毒5型（recombinant adenovirus 5,rAd5）-诺如病毒（Norovirus,NoV）GⅡ.4型-VP1病毒样颗粒（virus-like particle,VLP），并进行鉴定。方法 将重组腺病毒质粒pAd5-eGFP及pAd5-NoV-GⅡ.4-VP1分别转染293T细胞，拯救获得重组腺病毒rAd5-eGFP和rAd5-NoV-GⅡ.4-VP1。rAd5-eGFP在293T细胞上连续传代，验证其载体功能。将rAd5-NoV-GⅡ.4-VP1在293T细胞上进行传代，NoV-GⅡ.4-VP1经表达及纯化后，自组装形成NoV-GⅡ.4-VLP，并进行Western blot、ELISA检测及电镜观察。结果 镜下观察各代rAd5-eGFP均可见绿色荧光，且亮度随代次增加而增强。各代rAd5-NoV-GⅡ.4-VP1收获液中均可见NoV-GⅡ.4-VP1蛋白表达，相对分子质量约58 900。NoV-GⅡ.4-VLP可与兔抗NoV-GⅡ.4-VP1血清发生特异性结合，具有与天然的NoV病毒颗粒相似构象，可有效识别志愿者唾液样本中的NoV受体；镜下观察，其形态完整，呈球状，直径为43.5～58.3 nm，颗粒表面有少数突起，可能为VP1自组装时暴露于颗粒表面的P结构域。结论 表达的重组腺病毒NoV-GⅡ.4-VLP具有完整的VLP结构和良好的特异性，有望用于NoV腺病毒载体疫苗的相关研究。
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