【摘 要】
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目的：优化5＇-cDNA末端快速扩增（5＇-RACE）实验平台，用于定位副溶血弧菌（VP）基因的转录起始位点。方法：提取VP的总RNA，用rDNaseI消化去除可能污染的基因组DNA；利用T4RNA连接酶将已知序列的
【机 构】
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中国疾病预防控制中心传染病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室,军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室
【基金项目】
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国家自然科学基金(31170127);中国疾病预防控制中心青年科研基金(2012A103)
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目的：优化5＇-cDNA末端快速扩增（5＇-RACE）实验平台，用于定位副溶血弧菌（VP）基因的转录起始位点。方法：提取VP的总RNA，用rDNaseI消化去除可能污染的基因组DNA；利用T4RNA连接酶将已知序列的寡核苷酸片段连接至RNA的5’端，进而将其逆转录成cDNA；以cDNA为模板，采用巢式PCR技术扩增目的基因DNA片段，并将其直接克隆入T载体；最后通过测序比对的方法确定靶基因的转录起始位点。利用引物延伸实验进一步研究VPAl027的转录起始位点，以检验5＇-RACE实验结果的可靠性。结果：5
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